دوره 29، شماره 1 - ( (در حال تکمیل) 1405 )
جلد 29 شماره 1 صفحات 0-0 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Faghihi F, Amani J, Gholami M, salahshourifar I. Construct and cloning of CRISPR /Cas9 target gene and confirmation of cell line identity by QF - PCR. J Arak Uni Med Sci 2026; 29 (1)
URL: http://jams.arakmu.ac.ir/article-1-8269-fa.html
URL: http://jams.arakmu.ac.ir/article-1-8269-fa.html
فقیهی فاطمه، امانی هارونی جعفر، غلامی میلاد، سلحشوری فر ایمان. ساخت و کلونینگ وکتور CRISPR/Cas9 هدفمند ژن CDKL5 و تایید هویت خط سلولی با روش QF-PCR. مجله دانشگاه علوم پزشكي اراك. 1405; 29 (1)
1- دانشجوی دکتری، گروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران
2- انستیتو فناوریهای پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله، تهران، ایران ،jafar.amani@gmail.com
3- گروه بیوشیمی و ژنتیک، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران
4- گروه زیستشناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران
2- انستیتو فناوریهای پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله، تهران، ایران ،
3- گروه بیوشیمی و ژنتیک، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران
4- گروه زیستشناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران
چکیده: (185 مشاهده)
زمینه و هدف: اختلال طیف اوتیسم (ASD) و اختلال کمبود CDKL5 از جمله اختلالات عصبی-رشدی با ریشه ژنتیکی هستند که نیازمند مدلهای دقیق مولکولی برای مطالعه مکانیسمهای بیماری و توسعه درمانهای نوین میباشند. سیستم ویرایش ژنوم CRISPR/Cas9 ابزاری کارآمد برای ایجاد تغییرات هدفمند در ژنوم است. هدف این مطالعه، طراحی و ساخت وکتور CRISPR/Cas9 حامل sgRNA اختصاصی برای ژن CDKL5 و تایید کلونینگ و هویت خط سلولی مورد استفاده به کمک روشهای مولکولی بود.
روش بررسی: در این مطالعه تجربی، ابتدا sgRNA اختصاصی برای ناحیه مورد نظر در ژن CDKL5 طراحی شد. الیگوهای Forward و Reverse آنیل شده و در وکتور PX458 کلون شدند. پس از ترانسفورماسیون باکتری E. coli سویه DH5α، کلونیهای مثبت به روش Colony PCR و توالییابی تایید شدند. همچنین جهت اطمینان از هویت خط سلولی HEK293T مورد استفاده، آزمون QF-PCR برای تعیین جنسیت و بررسی کروموزومی انجام شد.
یافتهها: نتایج Colony PCR وجود باند مورد انتظار 230 جفت بازی را در کلونیهای منتخب نشان داد. توالییابی نیز Insert صحیح sgRNA را در وکتور تایید کرد. نتایج QF-PCR الگوهای Peaks مشخص برای کروموزومهای جنسی را نشان داد که هویت خط سلولی را تایید میکرد.
نتیجهگیری: ساخت وکتور CRISPR/Cas9 هدفمند ژن CDKL5 با موفقیت انجام شد و تاییدیههای مولکولی لازم شامل کلونینگ و بررسی خط سلولی حاصل گردید. این وکتور میتواند برای مطالعات بعدی ویرایش ژن در مدلهای سلولی مورد استفاده قرار گیرد.
روش بررسی: در این مطالعه تجربی، ابتدا sgRNA اختصاصی برای ناحیه مورد نظر در ژن CDKL5 طراحی شد. الیگوهای Forward و Reverse آنیل شده و در وکتور PX458 کلون شدند. پس از ترانسفورماسیون باکتری E. coli سویه DH5α، کلونیهای مثبت به روش Colony PCR و توالییابی تایید شدند. همچنین جهت اطمینان از هویت خط سلولی HEK293T مورد استفاده، آزمون QF-PCR برای تعیین جنسیت و بررسی کروموزومی انجام شد.
یافتهها: نتایج Colony PCR وجود باند مورد انتظار 230 جفت بازی را در کلونیهای منتخب نشان داد. توالییابی نیز Insert صحیح sgRNA را در وکتور تایید کرد. نتایج QF-PCR الگوهای Peaks مشخص برای کروموزومهای جنسی را نشان داد که هویت خط سلولی را تایید میکرد.
نتیجهگیری: ساخت وکتور CRISPR/Cas9 هدفمند ژن CDKL5 با موفقیت انجام شد و تاییدیههای مولکولی لازم شامل کلونینگ و بررسی خط سلولی حاصل گردید. این وکتور میتواند برای مطالعات بعدی ویرایش ژن در مدلهای سلولی مورد استفاده قرار گیرد.
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
