fa موتاسیون M338T کانال پتاسیمی(Kir1.1b) ROMK2 هدف گذاری اشتباهی را در سلول‎های MDCK سبب می‎شود علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle زمینه و هدف: سندرم بارتر از اختلالات توبولی کلیه است که سبب کاهش باز جذب سدیم و کلر در قسمت ضخیم بازوی بالا رونده لوله هنله و سبب دفع سدیم و کلر می‎شود. سندرم بارتر نوع 2 با موتاسیون‎های ژن KCNJ1 ایجاد می‎شود که کانال‎های پتاسمی حساس به آدنوزین‎ تری فسفات تصحیح کننده به سمت داخلKir1.1 (ROMK) را کد می‎کند. در این پژوهش اثرات موتاسیون جایگاه 338 بر روی کانال پتاسیمی ROMK2 بررسی گردیده است. مواد و روش‎ها: در این مطالعه آزمایشگاهی، با موتاسیون‎زای مستقیم اسید آمینه ترئونین جایگزین اسید آمینه متیونین گردید (موتاسیون M338T). کانال‎های پتاسیمی ROMK2 نوع طبیعی و نوع موتاسیون یافته M338T درون اووسیت‎های زاینوپوس لویس و به صورت موقتی در سلول‎های کشت داده شده MDCK بیان گردیدند. با تکنیک ثابت نگه داشتن ولتاژ با استفاده از دو الکترود، جریان‎های یونی مربوط به کانال‎های پتاسیمی ROMK2 و موتاسیون یافته در اووسیت‎ها اندازه‎گیری گردید. با تکنیک میکروسکوپی کونفو کال توزیع کانال‎های پتاسیمی ROMK مارک شده با EGFP (برچسب‎دار) در غشاهای سلول‎های MDCK بررسی گردید. یافته‎ها: کانال‎های پتاسیمی ROMK2 نوع طبیعی و نوع موتاسیون یافته M338T درون اووسیت‎ها عملکردی یکسان داشتند. توزیع کانال‎های پتاسیمی ROMK2 طبیعی و موتاسیون یافته M338Tدر غشای سلول‎های MDCK فاقد قطبیت و سلول‎های دارای قطبیت تفاوت داشت. نتیجه گیری: موتاسیون جایگاه M338T باعث تغییر در تداخلات قسمت کربوکسیل کانال‎های پتاسیمیROMK2 می‎گردد. هدف گذاری اشتباهی در in vivo، نیروی پیش برنده ترشح پتاسیم و باز جذب سدیم و کلر در این قسمت نفرون را کاهش می‎دهد. Background: Bartter syndrome is renal tubular disorders that inhibit salt transport and increased renal salt wasting. Type II Bartter syndrome is caused by mutations in the KCNJ1 gene which encodes the inwardly rectifying ATP-sensitive potassium channel Kir1.1 (ROMK). They play a vital role in secretion of potassium into the tubule lumen. The effects of mutation at position 338 of ROMK2 (Kir1.1.b) was investigate. Materials and Methods: Site-directed mutagenesis was used to substitute of threonine for methionine at position 338 of ROMK2 (Kir1.1.b). M338T mutant ROMK2 expressed in oocytes of Xenopus laevis, and in a non-polarized mammalian cell line (MDCK). Two electrode voltage clamp and were used to measure oocyte ROMK-dependent currents. Confocal microscopy of EGFP-tagged ROMK2 determined express and distribution of these channels in MDCK cells. Results: The M338T mutant ROMK2 protein expressed in oocytes was functionally identical to wild type. Its cellular distribution was different in polarized and non-polarized MDCK cells. Conclusion: The M338T mutation is altered residue interactions within the carboxyl terminus of ROMK2 channels. Thus mistargeting of ROMK2 in vivo reduces the driving force for potassium secretion in the TAL and reduces salt reabsorption by this nephron segment. سندرم بارتر، کانال پتاسیمی ROMK2، موتاسیون M338T، غشاء اووسیت Bartter syndrome, ROMK2, M338T mutant, MDCK Cell, Xenopus laevis 36 47 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-62-3&slc_lang=fa&sid=1 Saeed Hajihashemi سعید حاجی هاشمی s.hajihashemi@gmail.com 4600319475328460015427 4600319475328460015427 Yes Valerie Collins والری کولینز 4600319475328460015428 4600319475328460015428 No Gordon Cooper گوردون کوپر 4600319475328460015429 4600319475328460015429 No استنلی وایت 4600319475328460015430 4600319475328460015430 No