fa جداسازی، شناسایی و اندازه گیری افلاتوکسین متصل به آلبومین در سرم رات های تیمار شده با افلاتوکسین B1 علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle زمینه و هدف: افلاتوکسین‎ها و به خصوص افلاتوکسین B1، اثرات مرگ بار و جبران ناپذیری روی سلامت انسان و حیوانات دارند. هدف از انجام این تحقیق، ارایه یک روش حساس، اختصاصی و نسبتاً سریع برای جداسازی، شناسایی و اندازه‎گیری افلاتوکسین متصل به آلبومین در سرم می‎باشد. مواد و روش‎ها: در این تحقیق تجربی- آزمایشگاهی سه گروه رات انتخاب و به عنوان کنترل مثبت (تیمار شده با افلاتوکسین (B1، منفی (بدون تیمار خاص) و استاندارد (تیمار شده با افلاتوکسین B1 رادیواکتیو) مورد استفاده قرار گرفتند. پس از خون‎گیری از رات‎ها، سرم خون و سپس آلبومین سرم جداسازی شد. آلبومین توسط پروناز هیدرولیز گردید و در نهایت افلاتوکسین جدا شده از آلبومین به سیستم کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا تزریق و با آشکارگر فلورسانس مورد شناسایی و اندازه‎گیری قرار گرفت. یافته‎ها: به کمک الکتروفورز روی ژل پلی اکریلامید نشان داده شد که آلبومین جدا شده از سرم کاملا خالص می‎باشد. در روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا، کمترین میزان اندازه‎گیری برای افلاتوکسین متصل به آلبومین 60 پیکوگرم در میلی‎لیتر تعیین گردید. میانگین میزان افلاتوکسین در سرم رات‎های کنترل مثبت، 2/19 نانوگرم بر میلی‎گرم آلبومین محاسبه شد. طی آزمایشات درون-سنجشی و بین سنجشی تکرار پذیری بسیار خوبی برای این روش مشاهده گردید. نتیجه گیری: میزان افلاتوکسین متصل به آلبومین با میزان دریافت افلاتوکسین متناسب است. این تحقیق با استفاده از نمونه سرم رات طراحی شده اما از آنجایی که آلبومین هیدرولیز شده و از افلاتوکسین جدا می‎شود روش فوق قابل استفاده برای اندازه‎گیری افلاتوکسین متصل به آلبومین در نمونه سرم انسانی نیز می‎باشد. Background: Aflatoxins, especially aflatoxin B1, have lethal effects on human and animal health. This study is intended to present a specific, sensitive, and relatively fast method for measurement, detection, and isolation of aflatoxin-albumin (Af-Alb) adducts in serum. Materials and Methods: In this experimental-trial, three groups of rats were selected and used as positive control (treated with aflatoxin B1), negative control (without treatment) and standard (treated with radioactive aflatoxin B1). After drawing blood samples from the rats, blood serum and then, serum albumin were isolated. Albumin was hydrolyzed by pronase and eventually, was injected into HPLC system. The sample was then identified and measured by fluorescence detector. Results: Electrophoresis on PAGE revealed albumin isolated from serum to be perfectly pure. In HPLC method, detection limit for the measurement of Af-Alb adduct was determined to be 60 pg/ml. The mean of aflatoxin positive control rats serum was 19.2 ng/mg albumin. In inter- and intra-group experiments, a remarkable level of reproducibility was seen for this method. Conclusion: The amount of Af-Alb adduct is proportionate to the amount of aflatoxin received. This project was conducted with rat serum sample, but since albumin is hydrolyzed and can be isolated from aflatoxin, this method is applicable to the measurement of Af-Alb adducts in human serum samples. افلاتوکسین، افلاتوکسین B1، آلبومین، کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا Aflatoxin, Aflatoxin B1, Albumin, HPLC 44 52 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-831-1&slc_lang=fa&sid=1 Fariba Faraji فریبا فرجی faraji_fariba@hotmail.com 460031947532846009701 460031947532846009701 No Abbas S. Lotfi عباس صاحبقدم لطفی lotfi_as@yahoo.com 460031947532846009702 460031947532846009702 Yes Falamaki کاووس فلامکی allameha@modares.ac.ir 460031947532846009703 460031947532846009703 No Abdolamir Allameh عبدالامیر علامه mohsenifar_a@modares.ac.ir 460031947532846009704 460031947532846009704 No Afshin Mohsenifar افشین محسنی فر etemadikiab@yahoo.com 460031947532846009705 460031947532846009705 No Batul Etemadikia بتول اعتمادی کیا mota.biomed@gmail.com 460031947532846009706 460031947532846009706 No Ali Mota علی مطاع 460031947532846009707 460031947532846009707 No