Journal of Arak University of Medical Sciences

other طراحی یک روش الیزای توام جهت سنجش فاکتورهای روماتوئیدی IgM و IgA Designing of A Mixed Elisa Method for Detection of IgM and IgA Rheumatoid Factors عمومى General <div style="text-align: justify;">مقدمه: به دنبال ورود آنتی ژن به بدن، بر علیه آن آنتی بادی از کلاس های مختلف ساخته می شود. شناسایی و سنجش کلاس های مختلف آنتی بادی بر علیه یک آنتی ژن از ارزش خاصی برخوردار است. هدف از این تحقیق طراحی یک روش الیزا بر مبنای مهار فعالیت آنزیم کونژوگه شده با استفاده از مهار کننده های غیر رقابتی است. بر این اساس از فاکتور روماتوئید به عنوان یک مدل به منظور سنجش سایر کلاس های آنتی بادی بر ضد آنتی ژن استفاده شد. روش کار: در این مطالعه مقطعی تحلیلی از سرم ده بیمار مبتلا به آرتریت روماتوئید که با تست لاتکس مثبت بودند به منظور سنجش فاکتور روماتوئید از کلاس IgM و IgA  با روش الیزای توام و الیزای متداول استفاده گردید. در روش الیزای توام پس از اضافه نمودن کونژوگه اختصاصی ضد یک کلاس و سوبسترای مربوطه و ثبت نتایج، به جای توقف واکنش با اسید، از سیانید سدیم به عنوان مهار کننده غیر رقابتی استفاده شد و سپس بر روی همین مجموعه، گونژوگه ضد کلاس دیگری اضافه گردید و مجددا با سنجش جذب نوری، نتایج حاصله با الیزای متداول مورد مقایسه قرار گرفت. نتایج: نتایج به دست آمده نشان داد که هر چند میانگین جذب نوری و غلظت فاکتورهای روماتوئیدی از کلاس IgM  وIgA  در روش الیزای توام در مقایسه با روش الیزای متداول کم تر است ولی این اختلاف معنی دار نمی باشد و تفاوتی بین دو روش جهت سنجش این دو کلاس آنتی بادی وجود ندارد. همچنین همبستگی معنی داری بین دو روش در سنجش این دو ایزوتیپ وجود دارد (0/001=P، 0/9=r). نتیجه گیری: به نظر می رسد که علت کاهش جذب نوری در روش جدید ناشی از پدیده ممانعت فضایی است که توسط کونژوگه اول ایجاد می شود. با توجه به عدم اختلاف معنی دار بین دو روش و از طرفی با توجه به این مسئله که در روش مطرح شده نیاز به پوشاندن مجدد پلیت با آنتی ژن و اضافه نمودن سرم نمی باشد، بنابراین در روش توام هم در وقت و هم در مصرف آنتی ژن و پلیت صرفه جویی خواهد شد و این روش به عنوان جایگزینی برای روش الیزای متداول پیشنهاد می شود.</div> Introduction: different  isotypes  of  antibody  can  be  produced  by  immune  system  after  antigen  contact.  Detection  and  measurement  of  different  classes  of  antibody  against  the  antigen  is  very  important  in  some  cases.  The  aim  of  this  study  is  designing  of  an  ELISA  method  on  the  basis  of  inhibition  of  enzyme  activity  by  using  a  non-competitive  inhibitor.  Therefore  in  this  study  rheumatoid  factor  is  used  as  a  model  for  the  detection  of  different  other  classes  of  antibodies  against  the  antigen. Materials  and  Methods:  In  this  cross  sectional  analytical  study, we  measured  IgM  and IgA   rheumatoid  factors  in  sera  of  10  patients  with  rheumatoid  arthritis  and  positive  latex  test , by  mixed  and  routine  ELISA.  In  mixed  ELISA  the activity  of  the  first  conjugated  enzyme  was  blocked  by  a  non-competitive  inhibitor  after  adding  the  substrate. Then  the  next  conjugated  antibody, which  was  specific  for  another  isotype, was  added. By  optical  density, results  was  comparisoned  with  routine  ELISA. Results:  The  obtained  results  showed  that  the  average  optical  density  is  lower  when  compared  with  routine  ELISA , but  the  difference  is   not  statistically  significant.  however  these  two  methods  did  not  show  any  significant  difference  in  quantifying  antibody  isotypes. Also  there  is  a  positive  association  between  mixed  and  routine  ELISA (r=0.9, p=0.001). Discussion: Lower  optical  density  in  mixed  ELISA  is  probably  because  of  stick  hindrance  by  the  first  conjugate. So, because  there  is  no significant  difference  between  the  results  of  these two  types  of  ELISA, and  also  no  need  to  repeat  the  test  for  each  isotype  in  this  method, it  is  recommended  to  use the  new  method  instead  of  the  routine  one  to  save  time  and  reagents.   الیزای توام, کلاس آنتی بادی, فاکتور روماتوئید 45 50 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-15-20&slc_lang=other&sid=1 Ghasem Mosayebi قاسم مسیبی 4600319475328460076533 4600319475328460076533 Yes استادیار گروه ایمنی شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران. Kamran Moshfeghi کامران مشفقی 4600319475328460076534 4600319475328460076534 No استادیار گروه داخلی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران. Mohammad Moazzeni محمد موذنی 4600319475328460076535 4600319475328460076535 No دانشیار گروه ایمنی شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران. Fazel Shokri فاضل شکری 4600319475328460076536 4600319475328460076536 No استاد گروه ایمنی شناسی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران.