Journal of Arak University of Medical Sciences

other بیان پروتئین نو ترکیب P39 بر وسلا آبورتوس در باکتری اشریشیا کلی New Protein Expression of P39 Compound on Vesla Abortus in Escherichia Coli Bacteria علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle <div style="text-align: justify;">مقدمه: بروسلوز از مهم ترین بیماری های زئونوتیک است که باعث سقط جنین و نازایی در دام ها و بروز تب مواج در انسان می گردد. استفاده از واکسن رایج یعنی سویه  S19بروسلا آبورتوس عوارض متعددی برای دام ها دارد. پروتیین  P39بروسلا از جمله پروتیین های فضای پری پلاسمیک است که به عنوان یکی از شاخص های مهم ایمنی زا مطرح است. با تولید پروتیین نو ترکیب P39 می توان مطالعات بیش تری در زمینه توانایی این پروتئین در تحریک پاسخ های ایمنی زا بر علیه بروسلا انجام داد. لذا در این تحقیق تولید و تخلیص این پروتئین در باکتری اشریشیا کلی به صورت نو ترکیب انجام گرفته است. روش کار: در این تحقیق تجربی با استفاده از واکنش زنجیره ای پلیمراز، ژن P39 از باکتری بروسلا آبورتوس تکثیر گردید. پس از تخلیص ژن P39، در ناقلین پلاسمیدی و pSK+ 4T1 pGEXکلون گردید. بنابراین ساختارهای P39-pSK+ و P39-4T1 pGEXتهیه گردید. برای تولید پروتیین نوترکیب  P39 ابتدا ساختار پلاسمیدی P39-4T1 pGEX وارد باکتری اشریشیا کلی سویه BL21 شد. سپس تولید پروتیین با القای پلاسمید P39-4T1 pGEXتوسط IPTG صورت گرفت. پروتیین تولید شده با استفاده از کیت تخلیص پروتئین گلوتاتیون اس ترانسفرآز سفارز خالص گردید. میزان پروتیین خالص شده با استفاده از روش براد فورد اندازه گیری شد. نتایج: ترادف نوکلئوتیدی ژن تکثیر شده توسط PCR کلون شده در ناقل پلاسمیدی+pSK کاملا با ژن P39 بروسلا آبورتوس یکسان بود. تولید پروتیین P39 با القا پلاسمید P39-4T1 pGEX انجام گردید. میزان پروتیین خالص شده برابر 200 میکروگرم در میلی لیتر به دست آمد. نتیجه گیری: تولید پروتیین نو ترکیب  P39بروسلا آبورتوس که در سیتوپلاسم باکتری اشریشیا کلی ناپایدار است، با استفاده از ناقلین دارای پروتیین الحاقی نظیر 4T1  pGEXدر میزبان اشریشیا کلی سویه BL21 امکان پذیر است.</div> Introduction: Brucellosis is one of the most important zoonotic diseases that causes miscarriage and infertility in animals and causes human fever. The use of the common SS9 strain of Brucella abortus has several side effects for livestock. Brucella P39 protein is one of the plasma peripheral space proteins that is considered as one of the important immunogenic indicators. With the production of the new protein combination of P39, more studies can be done on the ability of this protein to stimulate immune responses against Brucella. Therefore, in this research, the production and purification of this protein in Escherichia coli bacteria has been done as a new compound. method: In this experimental study, using the polymerase chain reaction, the P39 gene was propagated by the bacterium Brucella abortus. After purifying the P39 gene, it was cloned into plasmid carriers pSK+ and pGEX4T1. Therefore, pSK+-P39 and pGEX4T1-P39 structures were prepared. To produce the recombinant protein P39, the plasmid structure pGEX4T1-P39 first entered the Escherichia coli bacterium BL21. The protein was then produced by IPTG by induction of pGEX4T1-P39 plasmid. The resulting protein was purified using the orderly purification protein glutathione S-transferase. The amount of purified protein was measured using the Brad Ford method. Results: The nucleotide sequence of the gene propagated by the cloned PCR in the plasmid carrier  pSK+ was exactly the same as the P39 gene of Brucella abortus. Production of P39 protein was performed by induction of pGEX4T1-P39 plasmid. The purified protein content was 200 micrograms per milliliter. Conclusion: The production of the new protein P39 compound Brucella Abortus, which is unstable in the cytoplasm of the Escherichia coli bacterium, is possible using carriers with additive proteins such as pGEX4T1 in the host of Escherichia coli strain BL21. بروسلا آبورتوس, ژن P39, پروتئین P39, بیان ژن, نو ترکیب, اشریشیا کلی Brucella Abortus, Gene P39, The Protein P39, Gene Expression, Recombinant, E. Col 1 7 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5931-11&slc_lang=other&sid=1 Hamid Abtahi حمید ابطحی 4600319475328460076414 4600319475328460076414 Yes استادیار گروه میکروب شناسی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران. Ali Hatef Salmanian علی هاتف سلمانیان 4600319475328460076415 4600319475328460076415 No استادیار مرکز ملی مهندسی ژنتیک و تکولوژی زیستی. Sima Rafati سیما رافتی 4600319475328460076416 4600319475328460076416 No دانشیار گروه ایمنولوژی، انستیتو پاستور ایران، ایران، ایران. Ghorban Behzadian Nejad قربان بهزادیان نژاد 4600319475328460076417 4600319475328460076417 No دانشیار گروه میکروب شناسی، دانشگاه تربیت مدرس تهران، تهران، ایران.