fa جداسازی، کلونینگ وتعیین توالی ژن همآگلوتینین آنفلوآنزای A(H1N1) به منظور تهیه بانک ژن همآگلوتینین علوم پایه Basic Sciences زمینه هدف: آنفلوآنزا بیماری مسری عفونت دستگاه تنفسی است که در فصل های سرد سال شیوع پیدا می کند. شیوع ویروس جدید آنفلوآنزا A(H1N1) در سال 2009 که جمعیت کثیری از مردم جهان را درگیر کرد، مرگ و میر قابل توجهی در پی‎داشت. مولکول همآگلوتینین که اصلی‎ترین گلیکوپروتئین سطحی ویروس آنفلوآنزا است، یکی از ارکان مهم در تهیه کیت‎های تشخیصی و واکسن‎های موثر بر علیه این بیماری است. لذا تهیه بانک ژن سویه‎های شایع به منظور دسترسی سریع به مقدار انبوه این مولکول بسیار ضروری می‎باشد. مواد و روش‎ها: این مطالعه از نوع پژوهشی- کاربردی می باشد. اولین قدم برای تهیه چنین بانکی، جداسازی ژن کامل همآگلوتینین و زیر واحدهای آن با استفاده از پرایمرهای اختصاصی وکلونینگ آنها در ناقلهای مناسب است. در این راستا ابتدا با استفاده از ژنوم ویروس استاندارد (A/NewCaledonia/20/99(H1N1)) کشت داده شده در سلول MDCK ، ژن کد کننده همآگلوتینین به روش RT-PCR تکثیر و در ناقل مناسب کلون گردید. یافته‎ها: جداسازی و کلونینگ ژن همآگلوتینین با روش PCR ، هضم آنزیمی و تعیین ترادف نوکلئوتیدی تایید گردید. با استفاده از پرایمرهای ویژه کلونینگ، سازه‎های مختلف واجد ژن همآگلوتینین مورد نظر به منظور بیان ژن در سلول حشره و باکتری اشریشیا کلی، تهیه گردید. نتیجه گیری: نتایج به دست آمده نشان دهنده تطابق کامل قطعات ژنی استخراج شده با همآگلوتینین ویروس آنفلوآنزای 20/99(H1N1) A/New Caledonia است که استفاده ازاین منبع ژنی، اهداف خاص از قبیل کلون کردن در وکتورهای بیانی مختلف یوکاریوتی و پروکاریوتی را امکان پذیر می‎سازد. Background: Influenza is a contagious respiratory infectious disease out breaking in cold seasons of the year. The outbreak of the new influenza A (H1N1) virus in 2009 involved large populations of the world with considerable mortality. Hemagglutinin (HA) molecule, the main surface glycoprotein of the influenza virus, is one of the key factors for serological diagnostic kits and vaccine development. Thus establishment of HA gene bank of the circulating influenza viruses is essential in gaining quick access to large amounts of protein. Materials and Methods: The first step in providing such a bank is detection and isolation of HA full genome and its subunits by using specific primers and cloning them in proper vectors. For this purpose, using standard virus genome (A/New Caledonia/20/99(H1N1)) cultured on MDCK cell, HA coding gene was proliferated by RT-PCR using specific primers. Results: Isolation and cloning of the HA gene was verified by RT-PCR, enzyme digestion and determining nucleotide synonymy. Through the use of specific cloning primers, different HA gene constructs were propagated for expression of the gene in insect cells and E.coli bacteria. Conclusion: The results indicated the complete compatibility of the extracted HA gene with the influenza (A/New Caledonia/20/99(H1N1)) hemagglutinin. It makes it possible to use the gene as a source of cloning in a variety of eukaryotic and prokaryotic expression systems آنفلوآنزا، بانک ژن، همآگلوتینین Gene bank, Hemagglutinin, Influenza 59 67 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-681-1&slc_lang=fa&sid=1 behrokh farahmand بهرخ فرهمند behrokh2@yahoo.com 4600319475328460010350 4600319475328460010350 No mahvash Khodabandeh مهوش خدابنده saba@NIGEb.ac.ir 4600319475328460010351 4600319475328460010351 No fereidoun mahboudi فریدون مهبودی mahboudi@pasteur.ac.ir 4600319475328460010352 4600319475328460010352 No fatemeh fotouhi فاطمه فتوحی fotouhi44@yahoo.com 4600319475328460010353 4600319475328460010353 No farzaneh barkhordari فرزانه برخورداری fbarkhordari@yahoo.com 4600319475328460010354 4600319475328460010354 No maryam saleh مریم صالح mfsalef@yahoo.com 4600319475328460010355 4600319475328460010355 No masoumeh tavasoti kheiri معصومه توسطی خیری mtkheiri@yahoo.com 4600319475328460010356 4600319475328460010356 Yes