fa بهینه‌سازی وکتور بیانی pET جهت فیوژن‌کردن پروتئین نوترکیب و بیوپلیمر پلی‌پپتید شبه‌الاستین علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle <div style="text-align: justify;"><strong>زمینه و هدف</strong> تکنیک DNA نوترکیب، یک روش قدرتمند و مناسب برای تولید بیوپلیمرهای پروتئینی با اختصاصیت در توالی آمینواسید و شیمی فضایی است. پلی‌پپتید شبه‌الاستین بیوپلیمری زیست‌سازگار، زیست‌تخریب‌پذیر و غیرایمونولوژیک است که در مطالعات گوناگون بیوتکنولوژی مورد استفاده قرار می‌گیرد. تگ ELP یک تکنیک ارزان، سریع و غیرکروماتوگرافی برای تخلیص پروتئین‌های هدف است. در این مطالعه وکتور بیانی pET-MOD جهت کنار هم قرارگیری توالی ژن‌های ELP و پروتئین نوترکیب هدف، به منظور تولید پروتئین فیوژن نوترکیب به همراه تگ ELP طراحی و ساخته شدند.&nbsp;<br> <strong>مواد و روش ها</strong> ژن MOD پس از طراحی و سنتز در بین سایت برش XbaI و XhoI موجود در وکتور pET-32a (+) کلون، و به سلول‌های (E.coli-BL21(DE3 ترانسفرم شد. سپس، کلنی‌ها بر اساس اندازه پلاسمید جداسازی و به وسیله برش توسط آنزیم‌های با اثر محدود، بررسی شد. تأیید نهایی کلنی‌های نوترکیبب با استفاده از PCR و توالی‌یابی (DNA (DNA sequencing انجام گرفت.<br> <strong>ملاحظات اخلاقی</strong> این مطالعه در کمیته اخلاق دانشگاه علوم پزشکی اراک با کد 11-146-92 تصویب شد.<br> <strong>یافته ها</strong> جایگزینی توالی MOD در وکتور pET-32a (+) باعث حذف قطعات بیان‌کننده تگ‌های فیوژن (Thioredoxin:TRX Histidine:HIS ،S-tag)، سایت شناسایی هضم آنزیمی پروتئاز (TEV) و جایگاه کلونینگ چندگانه و اضافه‌کردن توالی‌های شناسایی آنزیم با اثر محدود اختصاصی ژن ELP و ژن هدف شد. درنتیجه در وکتور بهینه‌شده pET-MOD کاهش 466 نوکلئوتید در سایز و بهبود ساختار ثانویه حاصل شد.<br> <strong>نتیجه گیری</strong> با توجه به بهبود ساختار فضایی و کاهش اندازه وکتور pET-MOD، و نیز امکان فیوژن‌کردن پروتئین نوترکیب با تگ ELP‌، امکان استفاده اختصاصی از این وکتور به منظور ELPyation پروتئین هدف وجود دارد.</div> <span dir="LTR"></span> <div style="text-align: justify;"><strong>Background and Aim</strong> recombinant DNA technique is a powerful and appropriate method for the production of protein biopolymers with specificity in amino acid sequence and spatial chemistry. Elastin-Like Polypeptide (ELP) is a biocompatible, biodegradable and non-immunological biopolymer used in various biotechnology studies. The ELP tag is a cheap, fast and non-chromatographic technique for purifying target proteins. In this study, pET expression vector was designed for the combination of ELP gene sequences and target recombinant protein in order to produce recombinant fusion protein with the ELP tag.<br> <strong>Methods & Materials</strong> MOD gene was transformed to E. coli-BL21 (DE3) cells after designing and synthesis among the XbaI and XhoI restriction sites in the pET-32a (+) vector of the clone. Then, colonies were isolated based on plasmid size and examined by cutting using restriction enzymes. The final recombinant colonies was verified using polymerase chain reaction method and DNA sequencing.<br> <strong>Ethical Considerations</strong> The Research Ethics Committee of Arak University of Medical Sciences approved all ethical considerations ofworking on laboratory animals (Code: 92-146-11).<br> <strong>Results </strong>Replacing the MOD sequence in the pET-32a vector (+) eliminated the components expressing the fusion tags (Thioredoxin, Histidine, and S-tag), the identification site of protease enzyme (tobacco etch virus), and multiple cloning site. In addition, it added specific restriction enzyme identification sequences of ELP gene and target gene. As a result, in the optimized pET-MODvector, 466 nucleotides reduced in size and the secondary structure was improved.<br> <strong>Conclusion </strong>Considering the improvement of spatial structure and reduction of pET-MOD vector size, as well as the possibility of the fusion of recombinant protein with the ELP tag, it is possible to use this vector for ELPyation of the target protein.</div> پلی‌پپتید شبه‌الاستین, پروتئین نوترکیب, فیوژن پروتئین Elastin-Like Polypeptide, Recombinant protein, Protein fusion 44 55 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2447-2&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Reza Soleyman محمدرضا سلیمان 4600319475328460069709 4600319475328460069709 No Department of Biotechnology, School of Medicine, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran. گروه بیوتکنولوژی و میکروبیولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران. Mostafa Khalili مصطفی خلیلی 4600319475328460069710 4600319475328460069710 No Blood Transfusion Research Center, High Institute for Research and Education in Transfusion Medicine, Tehran, Iran.; Blood Transfusion Center, Arak, Iran. مرکز تحقیقات انتقال خون، موسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون و پایگاه منطق های انتقال خون مرکزی، اراک، ایران.؛ مرکز انتقال خون، اراک، ایران. Alireza Soleyman Meiguni علیرضا سلیمان میگونی 4600319475328460069711 4600319475328460069711 No Department of Management, Yadegar Emam Khomeini Branch, Islamic Azad University, Shahre Rey, Iran. گروه مدیریت، واحد یادگار امام، دانشگاه آزاد اسلامی، شهر ری، ایران. Maryam Baazm مریم باعزم dr.baazm@arakmu.ac.ir 4600319475328460069712 4600319475328460069712 Yes Department of Anatomy, School of Medicine, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran.; Cellular and Molecular Research Center, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran. گروه علوم تشریح، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران.؛ مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران.