fa اثر سیلیبین انکپسوله در نانوذرات بر بیان ژن oprM در جدایه‌های سودوموناس آئروژینوزای مقاوم به دارو علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle <strong><span style="font-family:b mitra;">چکیده</span></strong><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">زمینه و هدف:</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> سودوموناس آئروژینوزا یک پاتوژن فرصت طلب بیمارستانی است که با استفاده از چندین گروه از آنتی بیوتیک</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">‌</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">ها در درمان باعث ظهور مقاومت چند دارویی شده است. یکی از مکانیسم</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">‌</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">های مقاومت دارویی در سودوموناس آئروژینوزا ،افزایش بیان سیستم افلاکس پمپ </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">MexXY-oprM</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> می</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">‌</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">باشد. سیلیبین به عنوان فلاونولیگنان اصلی سیلیمارین مستخرج از خارمریم، یک محافظت</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">‌</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">کننده کبدی است که اخیر</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">ً</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">ا اثرات ضد باکتریایی آن مطالعه شده است. در این مطالعه، اثر ترکیب سیلیبین و سیپروفلوکساسین بر بیان ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">oprM</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> در جدایه</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">‌</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">های بالینی سودوموناس آئروژینوزا مورد ارزیابی قرار گرفت.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">مواد و روش</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">‌</span></span><strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">ها:</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> در این مطالعه، هفت جدایه سودوموناس آئروژینوزای مقاوم به سیپروفلوکساسین تحت تیمار با سیپروفلوکساسین<span style="background:white;"><span style="color:black;">(</span></span></span></span><span dir="LTR" style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">1/2MIC</span></span></span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">)</span></span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> به تنهایی(نمونه کنترل) و در ترکیب با سیلیبین انکپسوله در میسل<span style="background:white;"><span style="color:black;">(نانوذرات) (نمونه تست) قرار گرفت. بعد از 24 ساعت، استخراج </span></span></span></span><span dir="LTR" style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">RNA</span></span></span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> و سنتز </span></span></span></span><span dir="LTR" style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">cDNA</span></span></span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> از سلول</span></span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">‌</span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">های تیمار شده و تیمار نشده با سیلیبین صورت گرفت و بیان ژن </span></span></span></span><em><span dir="LTR" style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">oprM</span></span></span></span></em><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> به روش</span></span></span></span><span dir="LTR" style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">Real-time PCR</span></span></span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> ب</span></span></span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">ه </span></span></span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">صورت کمی بررسی شد.</span></span></span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">یافته</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">‌</span></span><strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">ها:</span></span></strong><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> نتایج این مطالعه نشان داد که سیلیبین انکپسوله در نانوذرات (400 میکروگرم بر میلی لیتر) در طول 24 ساعت، مرگ را تا 50 درصد در جدایه</span></span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">‌</span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">های مقاوم تحت تیمار با سیپروفلوکساسین القاء می</span></span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">‌</span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">کند. هم</span></span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">‌</span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">چنین آنالیز</span></span></span></span><span dir="LTR" style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">Real-time PCR</span></span></span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> کمی آشکار کرد که سیلیبین انکپسوله در نانوذرات، بیان ژن </span></span></span></span><em><span dir="LTR" style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">oprM</span></span></span></span></em> <span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">را در مقایسه با سلول</span></span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">‌</span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">های بدون تیمار با سیلیبین کاهش می</span></span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">‌</span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">دهد.</span></span></span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">نتیجه</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">‌</span></span><strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">گیری:</span></span></strong><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> به نظر می</span></span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">‌</span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">رسد کاهش بیان </span></span></span></span><em><span dir="LTR" style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">oprM</span></span></span></span></em> <span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">در جدایه</span></span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">‌</span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">های مقاوم منجر به کاهش </span></span></span></span><span dir="LTR" style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">mexAB-oprM</span></span></span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> و</span></span></span></span><span dir="LTR" style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;"> mexXY-oprM</span></span></span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">در سطح سلول، متعاقباً کاهش خروج دارو به محیط خارج سلولی و افزایش حساسیت به آنتی بیوتیک</span></span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">‌</span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">ها می</span></span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">‌</span></span><span style="background:white;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">شود. </span></span></span></span><br> &nbsp; <div style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><span style="font-size: 14px;">&nbsp;<br> <strong>Abstract</strong><br> <strong><em>Background:</em></strong><em> Pseudomonas aeruginosa</em> is an opportunistic nosocomial&nbsp;pathogen that using several classes of antibiotics to treat has been led to the emergence of multiple drug resistance. One of the&nbsp;drug resistance mechanisms&nbsp;in <em>Pseudomonas aeruginosa</em> is overexpression of mexXY-oprM efflux pump system. Silybin as main flavonolignan of silymarin extracted from Silybum marianum is a hepatoprotective agent that its anti-bacterial properties was studied, recently. In this study, the effect of combination of silybin and ciprofloxacin on <em>oprM</em> gene expression in clinical isolates of <em>Pseudomonas aeruginosa</em> was evaluated.<br> <strong><em>Materials and Methods:</em></strong> In this study, seven ciprofloxacin resistant isolates of <em>Pseudomonas aeruginosa</em> were treated by ciprofloxacin (1/2MIC) only (control sample) and in the combination with silybin-encapsulated&nbsp;micelle (nanoparticles) (test sample). After 24h, RNA extraction and cDNA synthesis were performed in silybin treated and un-treated cells and <em>oprM </em>gene expression was quantitatively investigated by realtime PCR method.<br> <strong><em>Results:</em></strong> Results of this study showed that a silybin encapsulated&nbsp;in nanoparticles (400&micro;g/ml) induces death up to 50% in resistant isolates treated by ciprofloxacin (1/2MIC) during 24h. Also, quantitative Real-Time PCR analysis revealed that silybin encapsulated&nbsp;in nanoparticles decreases the expression of <em>oprM </em>gene compared to silybin untreated cells.<br> <strong><em>Conclusion:</em></strong> It seems that Decrease of <em>oprM</em> expression in resistant isolates lead to decrease of mexAB-oprM and mexXY-oprM in cell surface, subsequently decrease of antibiotic withdrawal to extracellular environment and increase of sensitivity to antibiotics.&nbsp;</span></span><br> &nbsp;</div> سیپروفلوکساسین, نانوذرات, سودوموناس آئروژینوزا, Real-time PCR کمی , oprM, سیلیبین Ciprofloxacin, Nanoparticles, oprM, Pseudomonas aeruginosa, Quantitative Real-Time PCR, Silybin 79 88 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4277-3&slc_lang=fa&sid=1 Aref Mohammadipour عارف محمدی پور arefmohamadi007@gmail.com 4600319475328460055970 4600319475328460055970 No Department of Biology, Rasht Branch, Islamic Azad University, Rasht, Iran گروه زیست شناسی، واحد رشت، دانشگاه آزاد اسلامی، رشت، ایران Najmeh Ranji نجمه رنجی n_ranji@iaurasht.ac.ir 4600319475328460055971 4600319475328460055971 Yes Department of Biology, Rasht Branch, Islamic Azad University, Rasht, Iran گروه زیست شناسی، واحد رشت، دانشگاه آزاد اسلامی، رشت، ایران Leila Asadpour لیلا اسدپور l.asadpour@yahoo.com 4600319475328460055972 4600319475328460055972 No Department of Biology, Rasht Branch, Islamic Azad University, Rasht, Iran گروه زیست شناسی، واحد رشت، دانشگاه آزاد اسلامی، رشت، ایران