fa بهینه‌سازی تشخیص همزمان سالمونلا و اشرشیاکلی O157:H7 در فرآورده‌های گوشتی و بررسی میزان آلودگی با روش Multiplex PCR علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle <div style="text-align: justify;"><strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">چکیده</span></span></strong><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">زمینه و هدف:</span></span></strong> <em><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">سالمونلا</span></span></span></em><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> و <em>اشرشیا کلی</em> از مهم ترین پاتوژن&shy;های آلوده&shy;کننده مواد غذایی به&shy; ویژه فرآورده&shy;های گوشتی هستند. تشخیص سریع، اختصاصی و همزمان این پاتوژن&shy;ها با انتخاب و بهینه&shy;سازی ژن&shy;های اختصاصی از اهمیت بالایی برخوردار است. این مطالعه با هدف تشخیص توأم <em>سالمونلا</em> و <em>اشریشیا کلی</em> </span></span></span><a href="http://www.biocompare.com/9776-Antibodies/7972009-Anti-E-coli-O157-H7-O157-H7-Polyclonal-antibody/"><span dir="LTR" style="text-decoration:none;text-underline:none;"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">O157:H7</span></span></span></span></a><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> در فرآورده&shy;های گوشتی و بررسی میزان آلودگی بر مبنای تکثیر دو ژن </span></span></span><em><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">rfbE</span></span></span></span></em><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> و </span></span></span><em><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">invA</span></span></span></span></em><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> با روش </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">Multiplex PCR</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> در استان زنجان واقع در شمال غربی ایران انجام گرفت.</span></span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">مواد و روش&shy;ها</span></span></strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">:</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">تعداد 74 نمونه گوشت به صورت تصادفی از نواحی مختلف استان زنجان جمع&shy;آوری شد. 25 گرم از هر نمونه گوشت در 225 میلی&shy;لیتر محیط مولر هینتون براث به طور کامل یکنواخت&shy;سازی و گرماگذاری گردید. جدایه&shy;های باکتری خالص&shy;سازی شد و استخراج </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">DNA</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> انجام گردید. تکثیر همزمان قطعات ژنی </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">rfbE</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> و </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">invA</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و با بهینه&shy;سازی واکنش </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">PCR</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> چندگانه انجام گرفت. در نهایت، حساسیت این روش با تلقیح رقت&shy;&shy;های مختلف از باکتری&shy;ها به نمونه&shy;های گوشتی بررسی گردید.</span></span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">یافته‌ها</span></span></strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">: از بین 74 نمونه گوشتی، تعداد 6 نمونه (1/8 درصد) به <em>اشریشیا کلی</em> </span></span></span><a href="http://www.biocompare.com/9776-Antibodies/7972009-Anti-E-coli-O157-H7-O157-H7-Polyclonal-antibody/"><span dir="LTR" style="text-decoration:none;text-underline:none;"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">O157:H7</span></span></span></span></a><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">، تعداد 4 نمونه (4/5 درصد) به <em>سالمونلا</em> و تعداد 2 نمونه (7/2 درصد) به هر دو باکتری آلوده بودند. واکنش </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">PCR</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> چندگانه در تشخیص توام هر دو پاتوژن در کمترین رقت تلقیح شده به نمونه&shy;های گوشتی نیز از حساسیت بالایی برخوردار بود.</span></span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">نتیجه‌گیری</span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">:</span></span></span></strong> <span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;">در این مطالعه، واکنش </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">PCR</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> چندگانه بر اساس ژن&shy;های بیماری&shy;زایی <em>سالمونلا</em> و<em> اشریشیا کلی</em> </span></span></span><a href="http://www.biocompare.com/9776-Antibodies/7972009-Anti-E-coli-O157-H7-O157-H7-Polyclonal-antibody/"><span dir="LTR" style="text-decoration:none;text-underline:none;"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">O157:H7</span></span></span></span></a><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> جهت تشخیص سریع و همزمان این پاتوژن&shy;ها با حساسیت و اختصاصیت بالا بهینه شد. واکنش </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">PCR</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:12.0pt;"> چندگانه به منظور شناسایی همزمان پاتوژن&shy;های منتقله از راه غذا در کنترل آلودگی&shy;های مواد غذایی روش قابل اعتمادی است.</span></span></span><br> &nbsp;</div> <div style="text-align: justify;"><span style="font-size:14px;"><span style="font-family: times new roman;"><strong>Abstract</strong><br> <em>Background: </em><em>Salmonella</em> spp. and <em>Escherichia coli</em> O157:H7 are the most&nbsp;common bacterial foodborne pathogens contaminating food products especially meat. It is essential to detect the pathogens rapidly, specifically, and simultaneously by selection and optimization of suitable&nbsp;reference&nbsp;genes. The present study was conducted to simultaneously detect <em>E. coli</em> O157:H7 and <em>Salmonella</em> spp. in meat products and contamination prevalence assay by using multiplex PCR based on <em>rfbE</em> and <em>invA</em> genes amplification in Zanjan province, northwest of Iran.<br> <em>Materials and Methods</em>: A total of 74 meat samples were obtained from various regions of Zanjan province, randomly. 25 grams of each meat sample was completely homogenized in 225 ml of Mueller-Hinton&nbsp;broth growth medium and incubated. Bacterial strains were purified and DNA extraction was performed from purified bacterial isolates. Simultaneous amplification of <em>rfbE</em> and <em>invA</em> gene fragments was done with specific primers by optimization of a multiplex PCR. Finally, the sensitivity of the method was evaluated by inoculation of the bacteria to the meat.<br> <em>Results</em>: Out of 74 meat samples, 6(8%), 4(5.4%), and 2(2.7%) samples were positive for <em>E. coli</em> O157:H7, <em>Salmonella</em>, and both <em>E. coli</em> O157:H7-<em>Salmonella</em>, respectively. Multiplex PCR indicated high sensitivity for simultaneous detection of the pathogens in lowest dilution of the bacteria that had been inoculated to the meat.<br> <em>Conclusion</em>: In this study, a multiplex PCR was optimized based on <em>Salmonella</em> spp. and <em>E. coli</em> O157:H7 virulence genes for rapid and simultaneous detection of the pathogens with high sensitivity and specificity. Multiplex PCR as a reliable tool for rapid and simultaneous detection of foodborne pathogens to prevent contamination of food products.</span></span><br> &nbsp;</div> فرآورده‌های گوشتی, سالمونلا, اشریشیا کلی O157:H7, Multiplex PCR Escherichia coli O157:H7, Meat products, Multiplex PCR, Salmonella 83 93 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4834-1&slc_lang=fa&sid=1 Hossein Morsali حسین مرسلی h.morsali99@gmail.com 4600319475328460056373 4600319475328460056373 No Department of Microbiology, Faculty of Basic Sciences, Qom Branch, Islamic Azad University, Qom, Iran گروه میکروب‌شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد قم، دانشگاه آزاد اسلامی، قم، ایران Golnaz i Asaadi Tehran گلناز اسعدی تهرانی najafpour.r62@gmail.com 4600319475328460056374 4600319475328460056374 No PhD in Molecular Genetic, Department of Genetics, Faculty of Basic Sciences, Zanjan Branch, Islamic Azad University, Zanjan, Iran دکتری تخصصی ژنتیک مولکولی،گروه ژنتیک، دانشکده علوم پایه، واحد زنجان، دانشگاه آزاد اسلامی، زنجان، ایران Hanieh Asaadi حانیه اسعدی g.asaadi@yahoo.com 4600319475328460056375 4600319475328460056375 No Department of Microbiology and Parasitology, Faculty of Medicine, Bushehr University of Medical Sciences, Bushehr, Iran گروه میکروب‌شناسی و انگل‌شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی بوشهر، بوشهر، ایران Sajjad Yazdansetad سجاد یزدان ستاد sajjad.yazdansetad@gmail.com 4600319475328460056376 4600319475328460056376 Yes Department of Microbiology, Faculty of Medicine, Golestan University of Medical Sciences, Gorgan, Iran گروه میکروب‌شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی گلستان، گرگان، ایران Reza Najafpour رضا نجف پور sajjad.yazdansetad@gmail.com 4600319475328460056377 4600319475328460056377 No Department of Microbiology, Faculty of Basic Sciences, Qom Branch, Islamic Azad University, Qom, Iran گروه میکروب‌شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد قم، دانشگاه آزاد اسلامی، قم، ایران