fa تأثیر تنظیم افزایشی miR-940 بر القای بیان هموگلوبین F و شاخص های رده اریتروئیدی در رده سلولی k-562 خون Oncology پژوهشي اصیل Original Atricle <p dir="RTL" style="margin-top:0cm;margin-right:28.9pt;margin-bottom:0cm;margin-left:28.9pt;margin-bottom:.0001pt;text-align:justify;line-height:normal;direction:rtl;unicode-bidi:embed;"><strong><span style="font-family:b mitra;">چکیده</span></strong></p> <p dir="RTL" style="margin-top:0cm;margin-right:28.9pt;margin-bottom:0cm;margin-left:28.9pt;margin-bottom:.0001pt;text-align:justify;line-height:normal;direction:rtl;unicode-bidi:embed;"><strong><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">زمینه و هدف</span></span></strong><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">: هموگلوبین جنینی پروتئین اصلی انتقال دهنده اکسیژن در جنین انسان است. هموگلوبین</span></span> <span dir="LTR"><span style="color:#333333;">A </span></span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">پس از تولد به جز در موادی از تالاسمی</span></span><span style="font-family:b mitra;">‌</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">ها و آنمی داسی شکل، جایگزین هموگلوبین</span></span> <span dir="LTR"><span style="color:#333333;">F</span></span> <span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">می</span></span><span style="font-family:b mitra;">‌</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">شود. مطالعات نشان می</span></span><span style="font-family:b mitra;">‌</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">دهند که بیان زنجیره گاما می</span></span><span style="font-family:b mitra;">‌</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">تواند در تنظیم فعالیت</span></span><span style="font-family:b mitra;">‌</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">های پس از رونویسی نقش داشته باشد. میکرو آر ان ای</span></span><span style="font-family:b mitra;">‌</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">ها که</span></span> <span dir="LTR"><span style="color:#333333;">RNA</span></span><span style="font-family:b mitra;">‌</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">های کوچک غیر کد شونده نامیده می</span></span><span style="font-family:b mitra;">‌</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">شوند ،</span></span><span dir="LTR"><span style="color:#333333;">mRNA</span></span> <span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">را مورد هدف قرار می</span></span><span style="font-family:b mitra;">‌</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">دهند و می</span></span><span style="font-family:b mitra;">‌</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">توانند منجر به سرکوبی مرحله ترجمه یا تخریب</span></span> <span dir="LTR"><span style="color:#333333;">mRNA</span></span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;"> شوند. هدف از این مطالعه، بررسی اثر </span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:#333333;">miR-940</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">بر روی بیان زنجیره گاما هموگلوبین</span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:#333333;">F</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">و مارکرهای رده اریتروئیدی در رده سلولی</span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:#333333;">k-562</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">می</span></span><span style="font-family:b mitra;">‌</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">باشد.</span></span></p> <p dir="RTL" style="margin-top:0cm;margin-right:28.9pt;margin-bottom:0cm;margin-left:28.9pt;margin-bottom:.0001pt;text-align:justify;line-height:normal;direction:rtl;unicode-bidi:embed;"><strong><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">مواد و روش</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;">‌</span><strong><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">ها</span></span></strong><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">: در این مطالعه تجربی، سلول</span></span><span style="font-family:b mitra;">‌</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">های رده</span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:#333333;">k-562</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">در محیط</span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:#333333;">RPMI1640</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">کشت داده شدند. سپس پیشساز ژن</span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:#333333;">miR-940</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">به روش الکتروپوریشن وارد رده سلولی</span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:#333333;">k-562&nbsp;</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">شد. در روزهای 3، 7 و14 ،</span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:#333333;">RNA</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">استخراج گردید و</span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:#333333;">cDNA</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;"> در روزهای انتخاب شده ساخته شد. افزایش بیان</span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:#333333;">miR-940</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">توسط تکنیک</span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:#333333;">real-time</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">تأیید گردید و میزان بیان زنجیره</span></span><span style="font-family:b mitra;">‌</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">های گاما و فاکتور</span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:#333333;">GATA-1</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">به روش</span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:#333333;">Quantitative Real-Time PCR</span></span> <span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">اندازه</span></span><span style="font-family:b mitra;">‌</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">گیری</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;"> شد. در نهایت، مارکرهای </span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">اریتروئیدی توسط فلوسایتومتری بررسی شدند.</span></span></p> <p dir="RTL" style="margin-top:0cm;margin-right:28.9pt;margin-bottom:0cm;margin-left:28.9pt;margin-bottom:.0001pt;text-align:justify;line-height:normal;direction:rtl;unicode-bidi:embed;"><strong><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">یافته</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;">‌</span><strong><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">ها</span></span></strong><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">:در روزهای 3، 7 و 14 بعد از انتقال ژن به داخل رده سلولی، میزان بیان فاکتور</span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:#333333;">GATA-1</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;"> و زنجیره گاما </span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">نسبت به گروه کنترل افزایش یافت. هم</span></span><span style="font-family:b mitra;">‌</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">چنین بیان شاخص</span></span><span style="font-family:b mitra;">‌</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">های رده اریتروئیدی افزایش پیدا کرد. </span></span></p> <p dir="RTL" style="margin-top:0cm;margin-right:28.9pt;margin-bottom:0cm;margin-left:28.9pt;margin-bottom:.0001pt;text-align:justify;line-height:normal;direction:rtl;unicode-bidi:embed;"><strong><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">نتیجه گیری</span></span></strong><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">: شواهد نشان می</span></span><span style="font-family:b mitra;">‌</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">دهد که افزایش</span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:#333333;">miR-940</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">در بالا رفتن بیان زنجیزه گامای هموگلوبین</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">نقش دارد. </span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">می</span></span><span style="font-family:b mitra;">‌</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">توان اظهار داشت که</span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:#333333;">miR-940</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;">ممکن است یک هدف درمانی قابل ملاحظه</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;"> در بالا بردن میزان</span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="color:#333333;">Hb F</span></span>&nbsp;<span style="color:#333333;"><span style="font-family:b mitra;"> باشد. مبتلایان به کم خونی داسی شکل و بتا-تالاسمی کاندیدهای مناسب برای این نوع درمان هستند.</span></span></p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><span style="font-size: 14px;"><strong>Abstract</strong></span></span></p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><span style="font-size: 14px;"><strong><em>Background:</em></strong> Fetal hemoglobin (&alpha;2&gamma;2) is the main oxygen transport protein in the human fetus. Fetal hemoglobin is nearly completely replaced by hemoglobin A, except in a few thalassemia cases and sickle cell anemia. Several studies have indicated that expression of &gamma;-globin might be regulated post-transcriptionally. Small non-coding RNA called microRNAs which target mRNA can lead to translated repression or mRNA decay. The aim of this study is to investigate the effect of miR-940 up-regultion on &gamma;-chain gene expression and erythroid markers in k562 cell line.</span></span></p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><span style="font-size: 14px;"><strong><em>Materials and Methods:</em></strong> In this experimental study, k562 cells were cultured in RPMI1640. Then pre miR-940 was transfected by electroporation method in k562 cell line. In 3, 7 and 14 days, RNA was extracted and cDNA synthesized in selected days. Up-regulation of miR-940 was confirmed by miRNA Quantitative real time PCR and then the expression &gamma; of chains and GATA-1 was investigated by QRT-PCR. Finally, erythroid markers were checked by flow cytometry.</span></span></p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><span style="font-size: 14px;"><strong><em>Results:</em></strong> In 3, 7 and 14 days after transfection, the GATA-1 and &gamma;-chain expression were increased in comparison with untransfected cells. Also, the expression of erythroid markers was increased.</span></span></p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><span style="font-size: 14px;"><strong><em>Conclusion:</em></strong> The data show that up-regulation of miR-940 has a role in the increase of &gamma;-chain gene expression in k-562 cell line. We suggest that miR-940 may be a significant potent therapeutic target for increasing Hb F level. Patients with sickle cell anemia and &beta;-thalassemia are suitable candidate for treatment in this way.</span></span></p> miR-940 , هموگلوبین, K-562 Hemoglobin, K-562, miR-940 25 37 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4720-1&slc_lang=fa&sid=1 Hengamesadat Razavi هنگامه سادات رضوی hengame.razavi@gmail.com 4600319475328460055897 4600319475328460055897 No Department of Hematology, School of Allied Medicine, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran گروه هماتولوژِی، دانشکده پیراپزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران Shaban Alizadeh شعبان علیزاده alizadehs@sina.tums.ac.ir 4600319475328460055898 4600319475328460055898 Yes Department of Hematology, School of Allied Medicine, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran گروه هماتولوژی، دانشکده پیراپزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران Amir Atashi امیر آتشی atashia@shmu.ac.ir 4600319475328460055899 4600319475328460055899 No Department of Hematology, Shahroud University of Medical Sciences, Semnan, Iran گروه هماتولوژی، دانشگاه علوم پزشکی شاهرود، سمنان، ایران Parvin Rahmani پروین رحمانی p.raha91@yahoo.com 4600319475328460055900 4600319475328460055900 No Department of Hematology, School of Allied Medicine, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran گروه هماتولوژِی، دانشکده پیراپزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران