fa انتخاب ژن رفرانس مناسب جهت نرمالیزه کردن داده های کمّی سنجش میکرو RNAها در نمونه پلاسمای افراد مبتلا به سرطان معده علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle <p dir="RTL" style="margin-right: 28.9pt; text-align: justify;"><strong>زمینه و هدف: </strong>میکرو &nbsp;<span dir="LTR">RNA</span>های موجود در گردش خون بیومارکرهایی امیدبخش برای تشخیص و ارزیابی بیماران مبتلا به سرطان می‌باشد. آزمون واکنش زنجیره ای پلی مراز کمی زمان واقعی(<span dir="LTR">RT-qPCR</span>) روشی حساس برای برآورد میزان بیان میکرو <span dir="LTR">RNA</span> ها است. با این وجود، در حال حاضر هیچ توافقی برای انتخاب ژن‌های رفرنس مناسب برای آنالیزهای <span dir="LTR">qPCR</span> بر روی میکرو <span dir="LTR">RNA</span> در گردش خون وجود ندارد. از این رو، هدف از این مطالعه انتخاب ژن رفرنس مناسب جهت نرمالیزه کردن نتایج <span dir="LTR">RT-qPCR</span> در نمونه‌های پلاسمای بیماران مبتلا به سرطان معده بوده است.</p> <p dir="RTL" style="margin-right: 28.9pt; text-align: justify;"><strong>مواد و روش</strong>‌<strong>ها:</strong> بر اساس مطالعات پیشین سه مولکول <span dir="LTR">SNORD47</span>، <span dir="LTR">U6</span> و <span dir="LTR">miR-103</span> به عنوان ژن رفرنس منتخب مورد بررسی قرار گرفتند. بدین ترتیب بعد از استخراج از نمونه‌های پلاسمای 40 بیمار مبتلا به سرطان معده و 40 نفر سالم، سطوح بیان این مولکول‌ها به روش <span dir="LTR">Real-time PCR</span> ارزیابی شد.</p> <p dir="RTL" style="margin-right: 28.9pt; text-align: justify;"><strong>یافته</strong>‌<strong>ها: </strong>نتایج نشان داد که تست‌های طراحی شده قادر به تشخیص حساس اهداف تعیین شده در یک دامنه خطی مناسب می‌باشند. بر اساس مقایسه دو گروه افراد بیمار و سالم، اگرچه میزان بیان مولکول <span dir="LTR">miR-103</span> بین دو گروه یکسان نبود (017/0<span dir="LTR">p=</span>)، <span dir="LTR">RNA</span>های <span dir="LTR">SNORD47</span> و <span dir="LTR">U6</span> دارای تغیرات سطوح بیانی مشابه بودند. با این وجود تغییرات در بیان مولکول <span dir="LTR">SNORD47</span> کمتر از مولکول <span dir="LTR">U6</span> بود.</p> <p dir="RTL" style="margin-right: 28.9pt; text-align: justify;"><strong>نتیجه</strong>‌<strong>گیری:</strong> نتایج حاصل از این مطالعه نشان داد که مولکول <span dir="LTR">SNORD47</span> دارای سطوح بیانی پایداری در نمونه پلاسمای افراد مبتلا به سرطان معده و افراد سالم است و می‌تواند به عنوان یک ژن رفرانس مناسب جهت نرمالیزه کردن داده‌های کمّی تست <span dir="LTR">qPCR</span> مورد استفاده قرار گیرد.</p> <p style="text-align: justify;"><strong><em>Background:</em></strong> Circulating microRNAs are promising biomarkers in diagnosis and assessment of cancerous patients. Quantitative Real-time PCR assay is a sensitive test for evaluating the levels of miRNAs expression. Nevertheless, there is no concurrence on selecting appropriate reference genes for qPCR analysis of miRNAs in circulation. Therefore, the current study aimed to select a suitable reference gene for normalizing the RT-qPCR assay results in plasma samples of patients with gastric cancer.</p> <p style="text-align: justify;"><strong><em>Materials and Methods:</em></strong> Based on previously published studies, three molecules SNORD47, U6 RNA, and miR-103 were selected as the candidate reference genes. After RNA extraction from plasma samples of 40 patients with gastric cancer and 40 healthy individuals, expression levels of these molecules were evaluated using Real-time PCR method.</p> <p style="text-align: justify;"><strong><em>Results:</em></strong> The results showed that the developed assays are able to diagnose their specified targets by a suitable linear range. By comparing patients and control groups, although the expression levels of miR-103 molecule were not equal between the two groups (p= 0.017), SNORD47 and U6 RNAs had similar expression levels. However, the variations of SNORD47 expression were lower that U6 RNA.</p> <p style="text-align: justify;"><strong><em>Conclusion:</em></strong> Based on the results of the current study, the SNORD47 molecule has a stable expression levels in plasma samples of patients with gastric cancer and normal individuals and can be used as an appropriate reference gene for normalizing the quantitative data of qPCR assay.</p> سرطان معده, میکرو RNA, RT-qPCR, ژن رفرنس Gastric cancer, miRNAs, RT-qPCR, Reference gene 12 20 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3686-1&slc_lang=fa&sid=1 Pegah Parvaee پگاه پروایی 4600319475328460063958 4600319475328460063958 No Department of Biotechnology and Molecular Medicine, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran. گروه زیست فن‌آوری و پزشکی مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران. Mahdieh Mondanizadeh مهدیه موندنی زاده M_mondanizadeh@yahoo.com 4600319475328460063959 4600319475328460063959 Yes Department of Biotechnology and Molecular Medicine, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran. گروه زیست فن‌آوری و پزشکی مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران. Behzad Khansarinejad بهزاد خوانساری نژاد 4600319475328460063960 4600319475328460063960 No Department of Microbiology and Immunology, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran. گروه میکروب شناسی و ایمنی شناسی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران. Amir Nader Emami Razavi امیر نادر امامی رضوی 4600319475328460063961 4600319475328460063961 No Cancer Institute, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran. انستیتو سرطان، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران.