fa همسانه سازی و بیان ایمونوتوکسین نوترکیب با استفاده از توکسین دیفتری و فاکتور محرک رشد کلنی گرانولوسیت علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle <p dir="RTL" style="margin-right: 28.9pt; text-align: justify;"><strong>زمینه و هدف:</strong> ایمونوتوکسین یک توکسین هدف‌مند است که از اتصال دو بخش مجزا (بخش ایمنی و بخش توکسینی) با واسط شیمیایی یا پپتیدی اختصاصی تشکیل می‌شود. هدف اصلی تحقیق حاضر تولید پروتئین هیبریدی و نوترکیب مشتمل بر توکسین دیفتری و فاکتور محرک رشد کلنی گرانولوسیتی است.</p> <p dir="RTL" style="margin-right: 28.9pt; text-align: justify;"><strong>مواد و روش ها: </strong>با توجه به ساختار اولین ایمنوتوکسین تجاری نوترکیب (اونتاک، پروتئین هیبریدی شامل توکسین دیفتری و اینترلوکین 2)، ژن به رمزدرآورنده توکسین دیفتری <span dir="LTR">(DT)</span> و فاکتور محرک رشد کلنی گرانولوسیت <span dir="LTR">(G-CSF)</span> با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و قالب پلاسمیدی <span dir="LTR">pET-IDZ3</span> (پلاسمید <span dir="LTR">pET21</span> حاوی ژن رمز کننده ایمونوتوکسین اونتاک) و <span dir="LTR">pET-GCSF</span> (پلاسمید <span dir="LTR">pET23</span> حاوی ژن رمز کننده <span dir="LTR">G-CSF</span>) تکثیر یافت. سپس اتصال دو قطعه ژنی با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و در طی روش <span dir="LTR">Soeing PCR</span> انجام شد. در ادامه، قطعه ژنی هیبریدی درون وکتور <span dir="LTR">(+) pET21a</span> منتقل گردید تا سازه ژنی <span dir="LTR">pET-DT-GCSF</span> به دست آید. ساخت این سازه ژنی از طریق توالی یابی، <span dir="LTR">SDS-PAGE</span> و وسترن بلات مورد تأیید قرار گرفت<span dir="LTR">.</span></p> <p dir="RTL" style="margin-right: 28.9pt; text-align: justify;"><strong>یافته</strong>‌<strong>ها:</strong> ژن به رمز درآورنده ایمونوتوکسین نوترکیب بین جایگاه‌های آنزیمی <em><span dir="LTR">EcoRI</span></em> و <em><span dir="LTR">NdeI</span></em> درون وکتور <span dir="LTR">(+)</span> <span dir="LTR">pET21a</span> به صورت صحیح کلون گردید و تولید سویه مولد ایمونوتوکسین نوترکیب <span dir="LTR">DT-GCSF</span> با استفاده از روش‌های مرسوم مورد تأیید قرار گرفت.</p> <p dir="RTL" style="margin-right: 28.9pt; text-align: justify;"><strong>نتیجه</strong>‌<strong>گیری:</strong> سیتوکین هیبرید پروتئین، <span dir="LTR">DT-GCSF</span>، می‌تواند در راستای مقابله با سلول‌های سرطانی و مهار آن‌ها که در سطح سلولی آن‌ها گیرنده‌های <span dir="LTR">G-CSF</span> زیاد بیان می‌شوند، مورد استفاده قرار گیرد.</p> <p style="text-align: justify;"><strong><em>Background:</em></strong> Immunotoxin (IT) is a directed toxin containing two distinct sections (immune and toxin parts) covalently bond using specific chemical or peptide linkers. The aim of this study is to produce a recombinant and hybrid protein containing diphtheria toxin (DT) and granulocyte colony stimulating factor (G-CSF).</p> <p style="text-align: justify;"><strong><em>Materials and Methods:</em></strong> According to the structure of the first commercial recombinant immunotoxin (Ontak, hybrid protein containing DT fused interlukine2), gene encoding of DT and G-CSF was amplified using specific primers and plasmid template of pET-IDZ3 (pET21 harboring the gene encoding ontak immunotoxine) and pET-GCSF (pET23 harboring G-CSF), respectively. The DT-GCSF fusion protein produced using soeing PCR and specific primers. Finally, pET-DT-GCSF construction prepared using subcloning of DT-GCSF into pET21a(+) and confirmed by sequencing, SDS-PAGE and western blot technique.</p> <p style="text-align: justify;"><strong><em>Results:</em></strong> Gene encoding of DT-GCSF inserted into <em>NdeI/EcoRI</em> site of pET21 and the construction of strain producing DT-GCSF recombinant immunotoxin was confirmed using customary methods.</p> <p style="text-align: justify;"><strong><em>Conclusion:</em></strong> The cytokine fusion protein, DT-GCSF, could be used for the inhibition of G-CSF receptor bearing cancer cells.</p> ایمونوتوکسین, توکسین دیفتری, فاکتور محرک رشد کلنی گرانولوسیت, بیان پروتئین Immunotoxin, Diphtheria toxin, Granulocyt colony stimulating factor, Protein expression 42 50 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4124-1&slc_lang=fa&sid=1 Fatemeh Donyapoor فاطمه دنیاپور 4600319475328460063968 4600319475328460063968 No Department of Sciences and Biotechnology, Malek- Ashtar University of Technology, Tehran, Iran. گروه علوم و فن‌آوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران. Mehdi Zeinoddini مهدی زین الدینی zeinoddini@modares.ac.ir 4600319475328460063969 4600319475328460063969 Yes PhD in Biochemistry, Department of Sciences and Biotechnology, Malek- Ashtar University of Technology, Tehran, Iran. دکترای تخصصی بیوشیمی، گروه علوم و فن‌آوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران. Ali Reza Saeedinia علی رضا سعیدی نیا 4600319475328460063970 4600319475328460063970 No PhD in Genetics, Department of Sciences and Biotechnology, Malek- Ashtar University of Technology, Tehran, Iran. دکترای تخصصی ژنتیک، گروه علوم و فن‌آوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران.