fa همسانه سازی ژن فیوژن پروتئین ویروس بیماری نیوکاسل در شاتل وکتور بکمیدی مشتق از باکیولوویروس به منظور بیان در لاین سلولی حشره علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle <p style="text-align: justify"><strong>زمینه و هدف</strong>: ویروس بیماری نیوکاسل (New Castle disease Virus) از مهم‌ترین عوامل بیماری‌زا در طیور است و واکسیناسیون هم‌چنان به عنوان راهکاری مؤثر برای کنترل این بیماری مطرح است. فیوژن پروتئین (F) قرار گرفته روی سطح ویروس بیماری نیوکاسل، در بیماری‌زایی این ویروس نقش اساسی دارد و می‌تواند به تنهایی باعث القاء ایمنی محافظتی گردد. با این پیش زمینه، هدف ما، تولید یک سازه نوترکیب (کد کننده پروتئین F) از شاتل وکتور بکمیدی مشتق از باکیولوویروس به منظور بیان آن در لاین سلولی حشره بود.</p> <p style="text-align: justify"><strong>مواد و روش‌ها</strong>: در این مطالعه تجربی، ابتدا ژن کامل F از سویه غیر بیماری‌زای لاسوتا ویروس بیماری نیوکاسل، به منظور تولید رشته DNA مکمل (cDNA)، با تکنیک RT-PCR فراوان سازی گردید. محصول تکثیر، در وکتور کلونینگ A/T و سپس در پلاسمید دهنده pFastBac Dual همسانه سازی گردید. بعد از تأیید فرآیند کلونینگ با دو روش PCR و آنالیز هضم آنزیمی، صحت توالی با روش تعیین توالی تأیید شد. در نهایت بکمید نوترکیب واجد ژن F متعاقباً در سویه باکتریایی Bac10DH تولید و سازه فوق با یک پنل اختصاصی PCR با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن F و پرایمرهای عمومی 13M مورد تأیید قرار گرفت.</p> <p style="text-align: justify"><strong>یافته‌ها</strong>: تحلیل تست‌های تأییدی نشان داد که سازه نوترکیب بکمیدی- بیان کننده ژن پروتئین F با توالی و چارچوب صحیح- با موفقیت ساخته شده است.</p> <p style="text-align: justify"><strong>نتیجه‌گیری</strong>: محصول این سازه نوترکیب واجد ژن F علاوه بر کاربرد مستقل در القاء ایمنی محافظتی می‌تواند به همراه محصول دیگر باکیولوویروس‌های نوترکیب- بیان کننده ژن‌های HN و NP برای تولید ذره شبه ویروسی (virus-Like particle,VLP) ویروس فوق در لاین سلولی حشره- مورد استفاده قرار گیرد.</p> <p dir="ltr" style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><em><strong>Background</strong></em>: Newcastle disease virus (NDV) is one of the major pathogens in poultry and vaccination is intended to control the disease, as an effective solution, yet. Fusion protein (F) on surface of NDV, has a fundamental role in virus pathogenicity and can induce protective immunity, alone. With this background, here our aim was to construct a baculovirus derived recombinant bacmid shuttle vector (encoding F-protein) in order to express it in insect cell line.</span></span></p> <p dir="ltr" style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><em><strong>Materials and Methods</strong></em>: In this experimental study, at first complete F gene from avirulent strain La Sota of NDV was amplified by RT-PCR to produce F cDNA. The amplicon was cloned into T/A cloning vector and afterwards into pFastBac Dual donor plasmid. After the verification of cloning process by two methods, PCR and enzymatic digestion analysis, the accuracy of F gene sequence was confirmed by sequencing. Finally, F-containing recombinant bacmid was subsequently generated in DH10Bac cell and the construct production was confirmed by a special PCR panel, using F specific primers and M13 universal primers.</span></span></p> <p dir="ltr" style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><em><strong>Results</strong></em>: Analysis of confirmatory tests showed that the recombinant bacmid, expressing of F-protein gene in correct sequence and framework, has been constructed successfully.</span></span></p> <p dir="ltr" style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><em><strong>Conclusion</strong></em>: The product of this F-containing recombinant bacmid, in addition to its independent application in the induction of protective immunity, can be used with the other individual recombinant baculoviruses, expressing HN and NP genes to produce NDV-VLPs in insect cell line.</span></span></p> باکیولوویروس, فیوژن پروتئین, ویروس بیماری نیوکاسل Baculovirus, Fusion protein, Newcastle disease virus (NDV) 80 89 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3170-1&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Sadegh Hashemzadeh محمد صادق هاشم زاده msh.biotechnology@gmail.com 4600319475328460068310 4600319475328460068310 No Applied Virology Research Center, Baghiatallah Medical Sciences Institute, Baghiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran پژوهشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم (عج)، مرکز تحقیقات ویروس شناسی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم (عج)، تهران، ایران Mohammad Reza Shafaati محمد رضا شفاعتی Shafaati.mohammadreza@gmail.com 4600319475328460068311 4600319475328460068311 Yes Department of Microbiology, Damghan Branch, Islamic Azad University, Damaghan, Iran گروه میکروب شناسی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد دامغان، دامغان، ایران Ruhollah Dorostkar روح الله درستکار rdorost@yahoo.com 4600319475328460068312 4600319475328460068312 No Applied Virology Research Center, Baghiatallah Medical Sciences Institute, Baghiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran پژوهشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم (عج)، مرکز تحقیقات ویروس شناسی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم (عج)، تهران، ایران