fa تولید و تخلیص نواحی آنزیمی هیالورونیداز استرپتوکوک در باکتری اشریشیا کلی علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle <p style="text-align: justify"><strong>زمینه و هدف</strong>: استرپتوکوکوس پیوژنز آنزیم هیالورونیداز خارج سلولی تولید می‌کند که با انتشار ارگانیسم در طول عفونت ارتباط مستقیم دارد. آنزیم هیالورونیداز قادر به تجزیه هیالورونیک اسید یا سیمان بین بافتی می‌باشد. از این آنزیم میتوان در درمان سرطان‌ها استفاده نمود. هدف از تحقیق حاضر کلون کردن و بیان توالی نوکلئوتیدی که در فعالیت آنزیمی هیالورونیداز نقش دارد، می‌باشد.</p> <p style="text-align: justify"><strong>مواد و روش‌ها</strong>: ابتدا توالی نوکلئوتیدی از ژن هیالورونیداز که در فعالیت آنزیمی دخیل است، شناسایی گردید. سپس ناحیه مورد نظر توسط PCR تکثیر یافت. قطعه تکثیر یافته در وکتور pET32a الحاق شد. پلاسمید نوترکیب به سلول E.coli BL21-DE3-plysS ترانسفورم گردید. سپس بیان ژن به وسیله IPTG القا گردید. پروتئین تولید شده با روش کروماتوگرافی تمایلی و با استفاده از کیت Ni-NTA تخلیص گردید. برای تایید پروتئین تولید شده از تست وسترن بلات استفاده گردید.</p> <p style="text-align: justify"><strong>یافته‌ها</strong>: ترادف نوکلئوتیدی ژن تکثیر شده با ژن هیالورونیداز استرپتوکوکوس پیوژن یکسان بود. غلظت پروتئین تولیدشده و خالص شده با کیت Ni- NTA برابر 500 میلی‌گرم در میلی‌لیتر بود. سرم بیماران مبتلا به عفونت‌های استرپتوکوکی در روش وسترن بلات با پروتئین تولید شده واکنش داد.</p> <p style="text-align: justify"><strong>نتیجه‌گیری</strong>: به طور کلی تولید نواحی آنزیمی هیالورونیداز استرپتوکوک پیوژنز در باکتری اشریشیاکلی امکان پذیر می‌باشد. پروتئین تولید شده خاصیت آنتی ژنیک خود را به خوبی حفظ می‌کند. با توجه به نیاز داخلی کشور و هم‌چنین بازدهی کم تولید و بیماری زا بودن استرپتوکوک‌ها تولید این محصول به صورت نوترکیب امکان پذیر است.</p> <p style="text-align: justify"><strong><em>Background</em></strong>: Streptococcus pyogenes produce extracellular hyaluronidase enzyme which is directly associated with the spreading of the organism during infection. Hyaluronidase enzyme is able to break hyaluronic acid or interstitial cement. This enzyme might be used in cancer treatment.The objective of the present study was to clone and express the nucleotide sequence of this enzyme which is involved in hyaluronidase enzymatic activity.</p> <p style="text-align: justify"><strong><em>Materials and Methods</em></strong>: The enzymatic region of hyaluronidase gene was detected by bioinformatics methods. The polymerase chain reaction method was used to amplify the region. The amplified product was cloned into the expression vector pET32a. E. coli BL21 (DE3) pLYsS was transformed with recombinant plasmids. Then gene expression was induced by IPTG. The expressed protein was purified successfully via affinity chromatography by NiNTA kit. The integrity of the product was confirmed by western-blot analysis.</p> <p style="text-align: justify"><strong><em>Results</em></strong>: The nucleotide sequence of amplified gene was consistent with the streptocuccal hyaluronidase gene. The concentration of recombinant protein calculated to 500 mg purified protein per liter. The enzymatic region of recombinant protein from Streptococcus pyogenes was recognized by all five patient’s sera with Streptococcus infection.</p> <p style="text-align: justify"><strong><em>Conclusion</em></strong>: In general, it is possible to produce the enzymatic regions of the Streptococcus pyogenes hyaluronidase in Escherichia coli. The antigenic property of the produced protein is well retained. Considering the product&#39s domestic demand and also low efficiency of production and pathogenicity of Streptococcus species, it is possible to produce it as recombinant product.</p> کلونینگ, بیان ژن, هیالورونیداز, استرپتوکوک پیوژنز Cloning, Gene expression, Hyaluronidase, Streptococcus pyogenes 67 75 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-33-10&slc_lang=fa&sid=1 Nafise O Sadat Mirjamali Mehrabadi نفیسه السادات میرجمالی مهرآبادی mirjamalyn@yahoo.com 4600319475328460043042 4600319475328460043042 No Department of Microbiology, science and research branch, Islamic Azad University, Arak branch, Arak, Iran کارشناس ارشد میکروبیولوژی، گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات اراک، اراک، ایران Safieh Soufian صفیه صوفیان s.sofian2001@gmail.com 4600319475328460043043 4600319475328460043043 No Department of Biology, Payame Noor University, Arak, Iran استادیار، گروه زیست شناسی، دانشگاه پیام نور اراک، اراک، ایران Hamid Abtahi حمید ابطحی habtahi2001@yahoo.com 4600319475328460043044 4600319475328460043044 Yes Department of Microbiology, School of Medicine, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran ایران، اراک، میدان بسیج، پردیس دانشگاهی پیامبر اعظم، دانشکده پزشکی، گروه میکروب شناسی پزشکی