fa تشخیص سریع مایکوباکتریوم های مقاوم به ریفامپین با استفاده از Real-time PCR عفونی Infection پژوهشي اصیل Original Atricle <p dir="rtl" style="text-align: justify margin-right: 36pt"><strong>زمینه و هدف:</strong> مقاومت دارویی در مایکو باکتریوم توبرکلوزیس یکی از نگرانی<span dir="ltr">‎</span>های جدی می<span dir="ltr">‎</span>باشد که محققان و پزشکان با آن مواجه هستد. شناسایی سریع توبرکلوزیس<span dir="ltr">‎</span>های مقاوم به منظور شروع بی<span dir="ltr">‎</span>درنگ و مناسب درمان با داروهای خط دوم ضروری می<span dir="ltr">‎</span>باشد. این امر منجر به افزایش بازده درمان و جلوگیری موثر از انتقال وگسترش این بیماری مسری خواهد شد. هدف از این مطالعه طراحی روشی مبتنی بر <span dir="ltr">Real-Time PCR</span> جهت تشخیص موتاسیون<span dir="ltr">‎</span>های موجود در ناحیه <span dir="ltr">RRDR</span> ژن <span dir="ltr">rpoB</span> که منجر به مقاومت به ریفامپین در مایکوباکتریوم توبرکلوزیس می<span dir="ltr">‎</span>شوند.</p> <p dir="rtl" style="text-align: justify margin-right: 36pt"><strong>مواد و روش</strong><span dir="ltr">‎</span><strong>ها: </strong>در این مطالعه تجربی پرایمر و پروپ توسط نرم افزارهای اختصاصی برای ناحیه <span dir="ltr">RRDR</span> ژن <span dir="ltr">rpoB</span> به منظور شناسایی جهش طراحی شد. برای ارزیابی حساسیت و ویژگی کلینیکی واکنش از نمونه<span dir="ltr">‎</span>های بالینی استفاده شد که پیش از این مقاومت و حساسیت آنها به وسیله تست حساسیت دارویی تناسبی تعیین شده بود.</p> <p dir="rtl" style="text-align: justify margin-right: 36pt"><strong>یافته</strong><span dir="ltr">‎</span><strong>ها: </strong>با استفاده از 40 نمونه بالینی(20 سویه حساس و 20 سویه مقاوم) حساسیت پروب استفاده شده برای تشخیص موتاسیون در کدون 526 و 531 معادل100 درصد در نظر گرفته شد. پرایمر و پروب<span dir="ltr">‎</span>های طراحی شده تنها به ناحیه اختصاصی <span dir="ltr">RRDR</span> ژن <span dir="ltr">rpoB</span> مایکوباکتریوم توبرکلوزیس متصل می<span dir="ltr">‎</span>گردند و مطالعات بیوانفورماتیکی هیچ گونه واکنش متقاطعی با ژنوم سایر میکرو ارگانیسم<span dir="ltr">‎</span>ها و انسان نشان ندادند. ویژگی بالینی روش راه اندازی شده به طور تجربی و با بررسی 25 نمونه منفی مورد آزمایش قرار گرفت و معادل 100 درصد در نظر گرفته شد<span dir="ltr">.</span></p> <p dir="rtl" style="text-align: justify margin-right: 36pt"><strong>نتیجه گیری</strong>: روش <span dir="ltr">Real-time PCR</span> راه اندازی شده به علت سرعت و حساسیت بالا می<span dir="ltr">‎</span>تواند به عنوان ابزاری مفید وکارا در تشخیص سریع مایکوباکتریوم<span dir="ltr">‎</span>های مقاوم به ریفامپین در نظر گرفته شود.</p> <p style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><strong><em>Background</em></strong>: The emergence of drug-resistant strain of M.tuberculosis is one of the most critical issues facing TB researchers and clinicians. Rapid diagnosis of drug-resistant tuberculosis is essential for the prompt initiation of effective second-line therapy to improve treatment outcome and limit transmission of this obstinate disease. The aim of this study is to develop a Real-time PCR assay for the detection of mutations in RRDR (rifampcin resistance determinant region) of rpoB which conferring rifampicin resistance in Mycobacterium tuberculosis.</span></span></p> <p style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"> <strong><em>Materials and Methods</em></strong>: In this experimental study, the primer and probe set were designed for a RRDR region of rpoB gene using a specialized software. Clinical specimens that had previously been evaluated resistant or sensitive by using convential method, were used for assessing the clinical sensitivity and specificity of the assay.</span></span></p> <p style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><strong><em>Results</em></strong>: The clinical sensitivity of the assay was determined 100%. The primers and the probes were rpoB specific and no cross-reaction was observed with other microorganisms and human genome bioinformatically. The clinical specificity of developed Real-time PCR assay was examined experimentally using 25 negative samples and determined to be 100%.</span></span></p> <p style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><strong><em>Conclusion</em></strong>: The developed real-time PCR assay can be used as an appropriate and efficient tool for the rapid detection of rifampicin-resistant Mycobacterium tuberculosis.</span></span></p> هایب پروب, مایکوباکتریوم توبرکلوزیس, مقاومت به ریفامپین, ژن rpoB Hyb probes, Mycobacterium tuberculosis, Rifampicin resistance, RpoB gene, 49 57 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-49-3&slc_lang=fa&sid=1 Behnaz Taheri بهناز طاهری 4600319475328460044113 4600319475328460044113 No Department of Biotechnology and Microbiology, Faculty of Medicine, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran گروه بیوتکنولوژی و میکروبیولوژی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران Siyamak Samiee سیامک سمیعی 4600319475328460044114 4600319475328460044114 No Food and Drug Laboratory Research Center, Ministry of Health and Medical Education, Tehran, Iran مرکز تحقیقات آزمایشگاهی غذا و دارو، وزارت بهداشت و درمان و آموزش پزشکی، تهران، ایران Mehdi Paryan مهدی پریان 4600319475328460044115 4600319475328460044115 No Biotechnology Research Center, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran گروه بیوتکنولوژی پزشکی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Ehsanollah Ghaznavi-Rad احسان اله غزنوی راد ghaznaviehs@yahoo.com 4600319475328460044116 4600319475328460044116 Yes Department of Microbiology, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran گروه میکروب شناسی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران