fa ایمنی زایی خوکچه هندی با پروتئین نوترکیب IpaD-StxB علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle <p dir="rtl" style="text-align: justify margin-right: 36pt"><strong>زمینه و هدف:</strong> شیگلوزیس یک مسئله جهانی مهم برای سلامتی بشر محسوب شده و تا به امروز واکسن موثری علیه شیگلا یافت نشده است. یکی از مهم<span dir="ltr">‎</span>ترین فاکتورهای بیماری‌زای اصلی در شیگلا دیسانتری تیپ 1، انتروتوکسین شیگلا یا <span dir="ltr">STx</span> می‌باشد. <span dir="ltr">STxB</span> دارای نقش ایمنی زایی، ادجوانتی و حاملی بوده و می‌توان با ممزوج کردن آنتی ژن<span dir="ltr">‎</span>های کاندیدای واکسن با این ادجوانت به تولید واکسن مناسب پرداخت. پروتئین <span dir="ltr">IpaD</span> نقش مهم و کلیدی در تهاجم، بیماری<span dir="ltr">‎</span>زایی و ایجاد عفونت توسط شیگلا دارد.</p> <p dir="rtl" style="text-align: justify margin-right: 36pt"><strong>مواد و روش‌ها:</strong> در این مطالعه تجربی، توالی ژنی <span dir="ltr">ipaD</span> و <span dir="ltr">stxB</span> از بانک ژنی استخراج و به صورت صناعی تهیه گردید و با انتقال این ژن به درون باکتری <em><span dir="ltr">E. coli BL21 DE3</span></em>، به<span dir="ltr">‎</span>وسیله  <span dir="ltr">PCR</span>و برش آنزیمی تایید و میزان بیان پروتئین مذکور مورد ارزیابی و با استفاده از تکنیک وسترن بلات، بیان آن مورد تایید قرار گرفت. بعد از تخلیص پروتئین نوترکیب با ستون کروماتوگرافی، چهار نوبت متوالی به خوکچه هندی تزریق شد و ایمنی<span dir="ltr">‎</span>زایی آن با استفاده از باکتری <em>شیگلا فلکسنری </em><span dir="ltr">2a</span> و سم فعال <em><span dir="ltr">O157:H7</span></em> <em><span dir="ltr">E.coli</span></em> مورد ارزیابی قرار گرفت.</p> <p dir="rtl" style="text-align: justify margin-right: 36pt"><strong>یافته‌ها:</strong> نتایج چالش نشان داد که خوکچه<span dir="ltr">‎</span>های هندی ایمن شده توانستند 28 برابر <span dir="ltr">LD₅₀</span> شیگا توکسین <em><span dir="ltr">E</span></em><em><span dir="ltr">. </span></em><em><span dir="ltr">coli</span></em> <em><span dir="ltr">O157</span></em><em><span dir="ltr">:</span></em><em><span dir="ltr">H7</span></em> را تحمل نمایند. در ضمن، چالش خوکچه<span dir="ltr">‎</span>ها توسط القای باکتری شیگلا فلکسنری در چشم نیز انجام شد که نتیجه آن حاکی از ابتلای خوکچه<span dir="ltr">‎</span>های شاهد به آب مروارید(کاتاراکت) و سالم ماندن خوکچه<span dir="ltr">‎</span>های ایمن شده بود.</p> <p dir="rtl" style="text-align: justify margin-right: 36pt"><strong>نتیجه</strong><span dir="ltr">‎</span><strong>گیری:</strong> نتایج به<span dir="ltr">‎</span> دست آمده از این تحقیق بیان<span dir="ltr">‎</span>گر آن است که پروتئین حاصل از امتزاج ژن<span dir="ltr">‎</span>های <span dir="ltr">ipaD</span> و <span dir="ltr">stxB</span>، می<span dir="ltr">‎</span>تواند کاندیدای مناسبی جهت تولید واکسن نوترکیب علیه انواع <em>شیگلا</em> باشد.</p> <p dir="rtl" style="margin-right: 36pt"></p> <p style="text-align: justify text-indent: 36pt margin: 0cm 0cm 0pt"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><b><i>Background</i></b><b>:</b> Shigellosis is a major global issue of human health. To date, no effective vaccine has been found against Shigella. One of the major virulent factors in<i> </i>Shigella<span dir="rtl"> </span>dysenteriae type 1 is Shigella enterotoxin or STx. STxB has immunogenic, adjuvant, or carrier properties. Vaccine candidate antigens can be coupled with this adjuvant for production of an appropriate vaccine. IpaD has a key role in invasion, virulence, and infection by Shigella.</span></span><span style="font-size: 11pt"><!--stripped--><!--stripped--></span></p> <p style="text-align: justify text-indent: 36pt margin: 0cm 0cm 0pt"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><b><i>Materials and Methods</i></b><b>:</b> In this study, the gene sequences of STXB and ipaD were obtained from gene bank and corresponding genes were prepared as synthetic construct and then transferred to <i>E. coli BL21DE3</i>. By PCR amplification and enzymatic digestion, protein expression levels were assessed. Its protein expression was confirmed by Western blot technique. After extraction by affinity chromatography, the recombinant protein was injected four times to guinea pigs. The pigs were, then, challenged by Shigella<span dir="rtl"> </span>felexneri 2a and active toxin of <i>E. coli O157:H7</i>.</span></span><span style="font-size: 11pt"><!--stripped--><!--stripped--></span></p> <p style="text-align: justify text-indent: 36pt margin: 0cm 0cm 0pt"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><b><i>Results</i></b><b>:</b> The results showed that groups of guinea pigs challenged with 28×LD₅₀of  toxin  completely survived.<span dir="rtl"> </span>Furthermore, guinea pigs were challenged by inducing Shigella<i><span dir="rtl"> </span></i>felexneri 2a in their eyes. The results showed that the control pigs got cataracts, whereas the immune pigs were in health.</span></span><span style="font-size: 11pt"><!--stripped--><!--stripped--></span></p> <p style="text-align: justify text-indent: 36pt margin: 0cm 0cm 0pt"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><b><i>Conclusion</i></b><b>: </b>The findings of this study suggest that this recombinant protein is a good candidate for production of a recombinant vaccine against Shigella family.</span></span><span style="font-size: 11pt"><!--stripped--><!--stripped--></span></p> آنتی ژنD پلاسمید تهاجمی IpaD, زیر واحد B سم شیگا (STxB), شیگلا دیسانتری تیپ 1 Invasion plasmid antigen D (IpaD), Shiga toxin B (STXB), Shigella dysenteriae type 1 83 93 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2170-1&slc_lang=fa&sid=1 Hosein Honari حسین هنری Honari.hosein@gmail.com 4600319475328460044024 4600319475328460044024 Yes Department of Biology, Faculty of Basic Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران Iman Amlashi ایمان املشی 4600319475328460044025 4600319475328460044025 No Department of Biology, Faculty of Basic Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران Mohammad Ebrahim Minaee محمد ابراهیم مینایی 4600319475328460044026 4600319475328460044026 No Department of Biology, Faculty of Basic Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران Sadegh Safaee صادق صفایی 4600319475328460044027 4600319475328460044027 No Department of Biology, Faculty of Basic Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران