fa تکثیر، کلونینگ و بیان ژن bp26((omp28 Brucellamelitensis بومی استان مرکزی به منظور تولید پروتئین نو ترکیب BP26 بهداشت Health پژوهشي اصیل Original Atricle <p style="text-align: justify"><strong>زمینه و هدف</strong>: بروسلوز بیماری ناتوان کننده‎ای است که هزینه گزافی را بر اقتصاد و اجتماع تحمیل می‎کند. بنابراین استفاده از بهترین، دقیق‎‎‎‎‎‎ترین و به صرفه‎ترین روش برای تشخیص این بیماری ضروری می‎باشد. عامل شایع بروسلوز در ایران بروسلا بوده و پروتئین BP26این باکتری خاصیت آنتی ژنیسیته خوبی دارد. بنابراین هدف از این تحقیق تولید پروتئین BP26 نوترکیب از باکتری بروسلا جهت استفاده در کیت تشخیص بروسلوز می‎باشد.</p> <p style="text-align: justify"><strong>مواد و روش‎ها</strong>: در این مطالعه ﺑﻨﯿﺎدی - ﮐﺎرﺑﺮدی، از باکتری کشت شده، تخلیص DNA ژنومیک به روش پروتئیناز K و فنل/کلرفرم انجام شد. سپس با توجه به اطلاعات توالی ژن bp26 Brucella melitensis موجود در بانک اطلاعات ژن، برای ژن مذکور پرایمر طراحی شده و واکنش زنجیره‌ای پلیمراز راه‎اندازی، بهینه‎سازی و انجام شد. در ادامه محصول واکنش ابتدا در وکتور PTZ57R/T الحاق گردید و پس از آن در وکتور pET-28a کلون گردید. وکتور نو‎ترکیب به میزبان E. coli BL21(DE3) منتقل گردید و پروتئین نوترکیب و با ستون کروماتو‎گرافی Ni-NTA علیه His tag تخلیص گردید.</p> <p style="text-align: justify">یافته‎ها: اندازه ژن تکثیر شده با اندازه بخشی از ژن bp26 Brucella melitensis موجود در بانک اطلاعات ژن مطابقت داشت. ژن bp26 بدون القاء با IPTG به میزان کم بیان شده و با افزودن آن به غلظت 1 میلی‎مولار به محیط کشت در ساعت سوم، حداکثر بیان مشاهده شد.</p> <p style="text-align: justify"><strong>نتیجه‎گیری</strong>: تولید پروتئین نوترکیب BP26 از باکتری ملیتنسیس بومی استان مرکزی با استفاده از ناقل پلاسمیدی pET-28a امکان‎پذیر گردید. با توجه به اهمیت این پروتئین و به منظور بررسی‎‎های بیشتر در آینده در خصوص تهیه کیت تشخیص بروسلوز، امکان تولید آن در کشور فراهم شد.</p> <p style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><strong><em>Background</em></strong>: Brucellosis is a debilitative disease that imposes heavy costs on the economy and society. Therefore, using the most accurate and efficient method to diagnose this disease is essential. In Iran, Brucella melitensis is the common causative agent for brucellosis and BP26 protein of this bacterium has a good level of antigenicity. Thus, the aim of this study is to produce Brucella melitensis recombinant BP26 protein with a PET28a expression vector. </span></span></p> <p style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><strong><em>Materials and Methods</em></strong>: In this applied-fundamental study, genomic DNA was isolated from bacterial culture through proteinase K (pK) and phenol/chlorophorm protocol. Then, two pairs of primers were designed based on the known sequence in the gene bank for amplification of Brucella melitensis bp26 gene and PCR reaction was set up and optimized. The PCR product was cloned first into PTZ57R/T vector and accessed on the PET28a vector and sequenced. The recombinant vector was transformed and expressed into E. coli BL21 (DE3). Then, the recombinant protein was purified with Ni-NTA column of chromatography against His tag.</span></span></p> <p style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><strong><em>Results</em></strong>: The size of PCR product was in accordance with the part of bp26 gene size in the gene bank. The bp26 gene without adding IPTG had little expression and 3 hours after adding IPTG with a 1 Mm concentration to culture media, extreme expression was observed. </span></span></p> <p style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><strong><em>Conclusion</em></strong>: The production of recombinant BP26 protein from isolated Brucella melitensis native to Markazi province was done. Noticing the importance of BP26 protein and its significance for future studies on providing brucellosis diagnosis kits, its production was made possible.</span></span></p> بروسلا ملیتنسیس, بروسلوزیس, پروتئین BP26, ژن bp26 Brucella melitensis, Brucellosis, Bp26 gene, OMP28 0 0 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1921-1&slc_lang=fa&sid=1 Maryam Azizpour مریم عزیزپور مغوان maryam.azizpour@gmail.com 4600319475328460043907 4600319475328460043907 No Department of Microbiology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Arak, Iran گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد اراک، ارک، ایران Davood Hosseini داود حسینی hosseinida@yahoo.com 4600319475328460043908 4600319475328460043908 Yes Razi Vaccine and Serum Research Institute, Arak Branch, Arak, Iran موسسه تحقیقات واکسن و سرم‎سازی رازی مرکزی، اراک، ایران Hossein Basiri حسین بصیری hosseinbasiri@yahoo.com 4600319475328460043909 4600319475328460043909 No Department of Microbiology, Islamic Azad University, Arak Branch, Arak, Iran ﮔﺮوه ﻣﯿﮑﺮبﺷﻨﺎﺳﯽ، دانشگاه آزاد اسلامی واحد اراک، اراک، ایران Neda Akbari ندا اکبری depbioakbari@yahoo.com 4600319475328460043910 4600319475328460043910 No Department of Microbiology, Islamic Azad University, Arak Branch, Arak, Iran ﮔﺮوه ﻣﯿﮑﺮبﺷﻨﺎﺳﯽ، دانشگاه آزاد اسلامی واحد اراک، اراک، ایران Mitra Nezamabadi میترا نظام آبادی mitra_nezamabadi@yahoo.com 4600319475328460043911 4600319475328460043911 No Department of Microbiology, Islamic Azad University, Arak Branch, Arak, Iran ﮔﺮوه ﻣﯿﮑﺮوبﺷﻨﺎﺳﯽ، دانشگاه آزاد اسلامی واحد اراک، اراک، ایران Saber Eskandari صابر اسکندری saber_eskandari_64@yahoo.com 4600319475328460043912 4600319475328460043912 No Department of Microbiology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Arak, Iran موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی مرکزی، اراک، ایران Mohsen Sarikhani محسن ساریخانی pune1984@gmail.com 4600319475328460043913 4600319475328460043913 No IISc, Bangalore, India مرکز تحقیقات هندوستان، هندوستان