fa بهینه سازی روش زنجیره‌ای پلی مرآز در تشخیص آلودگی آب به کلی فرم عمومى General چکیده مقدمه: در تشخیص عوامل میکروبی با استفاده از روش‌های ملکولی، تخلیص کروموزوم مرحله بسیار مهمی است. در این تحقیق با افزایش مدت زمان مرحله دناتوراسیون بدون تخلیص کروموزوم باکتری، با تخریب سلول، تکثیر DNA انجام می‌شود. روش کار: در این مطالعه تجربی، رقت‌های100/8 ، 100/4 ، 100/2 ، 100/1 ، 200/1 ، 400/1 ، 800/1 و 1600/1 از باکتری در آب مقطر تهیه گردید. پس از آن باکتری‌ها به روش فیلتراسیون از نمونه جدا گردید. بدون خالص سازی کروموزوم باکتری، با استفاده از روش زنجیره‌ای پلی مرآز و به کمک پرایمرهای طراحی شده، ژن 16sRNA تکثیر یافت. شناسایی آلودگی 15 حلقه چاه آب شهر اراک و مقایسه آن با روش MPN جهت بررسی حساسیت روش فوق انجام گرفت. نتایج: کشت رقت‌های تهیه شده نشان دهندۀ تأیید تعداد باکتری‌ها در این رقت‌ها بود. نتیجه واکنش زنجیره‌ای پلی مرآز رقت‌ها (پس از فیلتراسیون) نشان داد که این سیستم قادر است وجود باکتری در این رقت‌ها را شناسایی کند. علاوه بر آن مقایسه تشخیص آلودگی آب به دو روش MPN وPCR انجام گرفته در این تحقیق، نشان دهنده حساسیت بالای روش اخیر بود. نتیجه گیری: نتایج به دست آمده از این بررسی حاکی از آن است که با روش مذکور علاوه بر این که امکان بروز نتیجه منفی کاذب کمتر می‌شود نیاز به انجام مراحل سخت، پیچیده و وقت گیر تخلیص کروموزم نیز نمی باشد. Background: In molecular diagnosis of microbial agent, purification of chromosome is very important step. In this study, after cell destruction, DNA replication was done by increasing the denaturation time, without DNA purification. Methods and Materials: In this experimental study eight different dilution of E.coli (8/100, 4/100, 2/100, 1/100, 1/200, 1/400, 1/800 and 1/1600) solution were madce in D.W, Bacteria were separated by filtration. Polymerase chain reaction method was used to propagate 162 rRNA gene by design primers without DNA Purification. In order to confirme sensitivity of PCR, contamination of 15 different sources of Arak well water wafer was compared by MPN method. For confirmed sensitivity of PCR, 15 sources of water in Arak were examined and compared with MPN method. Results: Present of bacteria in diution sou tion were confirmed by culture. Polymerale Chain reaction (PCR) data were shown this method is able to recognize bacteria in above dilutions after filtration. This study showed high sensitivity of PCR method in compare to MPN method. Conclusion: Results were shown without stages of extraction of DNA, PCR were done without losing chromosome. Therefore false negative results were decrease and avoided from difficult phases. واکنش زنجیره ای پلی مرآز، آلودگی میکروبی آب، کلی فرم، تشخیص 1 7 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-33-2&slc_lang=fa&sid=1 Hamid Abtahi حمید ابطحی h_abtahi2@yahoo.co.uk 460031947532846008515 460031947532846008515 Yes Mohammadjavad Ghannadzadeh محمد جواد قناد زاده 460031947532846008516 460031947532846008516 No Ali hatef Salmanian علی هاتف سلمانیان 460031947532846008517 460031947532846008517 No Ehsan Ghaznavi Rad احسان غزنوی راد 460031947532846008518 460031947532846008518 No Masoud Karimi مسعود کریمی 460031947532846008519 460031947532846008519 No Neda Molaei ندا مولائی 460031947532846008520 460031947532846008520 No