fa بیان نوترکیب و تخلیص ناحیه 1 فاکتور کشنده باسیلوس آنتراسیس در Escherichia coli و تولید آنتی‌بادی پلی‌کلونال علیه آن در موش سوری عمومى General پژوهشي اصیل Original Atricle زمینه و هدف: سیاه‎زخم یک بیماری مشترک بین انسان و دام است. عامل ایجاد کننده بیماری، باکتری باسیلوس آنتراسیس می‎باشد که آنتی‎ژن حفاظت‎کننده و ناحیه یک فاکتور کشنده (LFD1) ایمونوژن‎های قوی این باکتری بوده و همواره به عنوان کاندیدای واکسن علیه باسیلوس آنتراسیس در نظر گرفته شده‎اند. هدف این مطالعه بیان و تخلیص LFD1 در باکتری Escherichia coli و تولید آنتی‎بادی پلی‎کلونال علیه آن در موش‎ سوری می‎باشد. مواد و روش‎ها: در این مطالعه تجربی، ژن LFD1 با جایگاه‎های برش آنزیمی BamHI و XhoI با واکنش PCR تکثیر و بعد از جداسازی، در وکتور بیانی pET28a(+) همسانه‎سازی گردید. به منظور بیان ژن، این وکتور به باکتری‎های صلاحیت‎دار E.coli-BL21(DE3)PLysS تراریخت شد. بیان ژن LFD1 تحت القایIPTG انجام و بعد از تخلیص پروتئین با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی، آنتی‎ژن حاصل در چهار نوبت به موش‎های سوری تزریق شد. آنتی‎بادی پلی‎کلونال تولید شده در سرم موش‎ها اندازه‎گیری گردید. یافته‎ها: ژن LFD1 کلون شده در وکتور بیانی pET28a(+) به وسیله PCR، هضم آنزیمی و توالی‎یابی تأیید شد. هم‎چنین پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله SDS-PAGE و لکه‎گذاری وسترن تایید گردید. در نهایت آنتی‎بادی پلی‎کلونال تولید شده از سرم موش‎ سوری جدا شده و به وسیله تست الایزا ارزیابی و تأیید گردید. نتیجه‎گیری: با توجه به بیان مناسب، تولید آسان این آنتی‎ژن و تیتر آنتی‎بادی پلی‎کلونال تولید شده علیه آنتی‎ژن LFD1 به دلیل ایمونوژنیسیته آن در موش‎های سوری، می‎توان آن را به عنوان کاندید واکسن علیه سیاه‎زخم در نظر گرفت. Background: Anthrax is a common disease among human and livestock which is caused by Bacillus anthracis. Bacillus anthracis has two strong immunogenic proteins: Protective antigen (PA) and lethal factor domain I (LFD1) that have always been considered as vaccine candidates against Bacillus anthracis. The aim of this study is to express and purify the lethal factor domain I (LFD1) in Escherichia coli and produce polyclonal antibody against it in mice. Materials and Methods: In this experimental study, LFD1 gene was amplified with BamH I and Xho I restriction site by PCR. After isolation, the gene was cloned to the expression vector pET28a (+). This vector was transformed to E. coli-BL21 (DE3) PLysSto to express LFD1 gene. The expression of LFD1 gene was induced by IPTG. After protein purification by affinity chromatography, the produced antigen was injected into mice for four times. Then the produced polyclonal antibody in mice serum was evaluated. Results: The cloned LFD1 gene in pET28a (+) vector was confirmed by PCR, enzymatic analysis, and sequencing. The expressed and purified recombinant protein was confirmed by SDS-PAGE and Western blotting. Finally, the isolated polyclonal antibody from mice serum was evaluated and confirmed by ELISA test. Conclusion: Noticing the appropriate expression, easy purification of LFD1, and the titer of produced polyclonal antibody against LFD1 in mice due to its immunogenicity, it can be considered as a good vaccine candidate against anthrax. سیاه‎زخم، باسیلوس آنتراسیس، ایمونوژن، آنتی‎بادی پلی‎کلونال Anthrax, Bacillus anthracis, immunogen, polyclonal antibody 51 60 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1812-1&slc_lang=fa&sid=1 Mehdi Rezaee مهدی رضائی mehdi_r424@yahoo.com 4600319475328460022178 4600319475328460022178 No ihu دانشگاه جامع امام حسین(ع) Hosein Honari حسین هنری honari.hosein@gmail.com 4600319475328460022179 4600319475328460022179 Yes ihu دانشگاه جامع امام حسین(ع) Ali mohammad Zand علی محمد زند ali2007mohammad@yahoo.com 4600319475328460022180 4600319475328460022180 No ihu دانشگاه جامع امام حسین(ع) Mohammad ali Arefpour torabi lمحمد علی عارف پور ترابی arefpourma@gmail.com 4600319475328460022181 4600319475328460022181 No ihu دانشگاه جامع امام حسین(ع)