fa اثر فسفوریلاسیون و دفسفوریلاسیون اسید امینه سرین جایگاه 362 بر روند آندوسیتوز کانال پتاسیمی نوع2 قسمت خارجی مدولا کلیه علوم پایه Basic Sciences مقدمه: در این مطالعه اثر فسفوریله و دفسفوریله کننده اسید امینه سرین جایگاه 362 برروند آندوسیتوزکانال پتاسیمی نوع 2 قسمت خارجی مدولا کلیه پس از بیان درغشاء اووسیت بررسی گردیده است. روش کار: در این مطالعه تجربی اووسیت‌های زاینوپوس لویس با استفاده از کلاژناز به روش استاندارد جدا گردیدند. روش تغییر سریع جهت ایجاد موتاسیون در انتهای کربوکسیل کانال پتاسیمی نوع 2 قسمت خارجی مدولا کلیه استفاده گردید. cRNA مربوط این کانال وموتاسیون های S362Aو S362D ایجاد شده به اووسیت‌ها تزریق گردید. پس از سه روز (زمان صفر) به محیط کشت برفلدین A، مهار کننده انتقال پروتئین‌های ساخته شده به غشاء به مقدار 25 میکرومولار یا اتانول به عنوان حلال برفلدین A اضافه گردید. از تکنیک ثابت نگه داشتن ولتاژ دو الکترود برای اندازه گیری جریان‌های یونی وهمچنین پتانسیل غشاء استفاده شد. نتایج: اووسیت‌های که کانال‌های پتاسیمی نوع 2 قسمت خارجی مدولا کلیه و یا موتاسیون فسفوریله کننده S362D را بیان می‌کردند در طی دوره انکوبه شدن در محلول برفلدین A کاهش معنی‌داری در میزان جریان یون پتاسیم وپتانسیل غشاء را نشان دادند. میزان کسر جریان برای کانال‌های پتاسیمی نوع 2 قسمت خارجی مدولا کلیه و موتاسیون فسفوریله کننده پس از 48 ساعت انکوبه شدن در برفلدینA برابر با 05/0±11/0 بود که به طور معنی‌داری باکسر جریان مربوط به موتاسیون دفسفوریله کننده 05/0±96/0 تفاوت داشت. نتیجه گیری: اسید آمینه سرین جایگاه 362 در قسمت داخلی ناحیه PDZ با ایجاد حالت فسفوریله در آندوسیتوز و تعیین تعداد کانال‌های پتاسیمی نوع 2 قسمت خارجی مدولا کلیه دخالت دارد. Background: In this study, the effects of S362A and S362D mutations on the membrane turnover and the stability of ROMK2 channel when expressing in Xenopus laevis oocytes are examined . Methods and Materials:In this experimental study, oocytes were isolated by standard protocols using collagens (Type 1A). Mutations of the cytoplasmic termini of ROMK2 were constructed using the quick-change approach for site-directed mutagenesis. Xenopus oocytes were injected with cRNA encoding ROMK2 or S362A or S362D mutant three days prior to treatment with BFA solution (time 0). Brefeldin A (BFA) was added to the OR3 medium (+BFA) at concentrations of 25µM (inhibit insertion of new proteins into the cell membrane) or ethanol as BFA vehicle (-BFA). Two-electrode voltage clamp (TEVC) was used to measure oocyte ROMK-dependent currents and membrane potential. Results: In oocytes was expressing ROMK2 and/or the S362A mutant, there was significant reduce in current and membrane voltage of K. The fractional currents for ROMK2 and S362D mutant demonstrated a slight difference 48h following treatment of oocytes with BFA, 0.160.05(n=18) and 0.110.05(n=18) respectively. This was however, significantly different from the fractional current of S362A mutant which stood at 0.960.05(n=24). Conclusion: Mutant Serine residue S362A which causes phosphorylation in endocytosis and helps determine the number of ROMK2, plays an important part in PDZ domain. کانال پتاسیمی، کانال پتاسیمی نوع 2 قسمت خارجی مدولا کلیه، موتاسیون S362A، موتاسیون S362D، ناحیه PDZ، فسفوریلاسیون : Potassium Channel, ROMK2, S362A Mutant, S362D Mutant, BFA, PDZ domain, Phosphorylation. 19 28 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-62-2&slc_lang=fa&sid=1 Saeed Hajihashemi سعید حاجی هاشمی s.hajihashemi@gmail.com 460031947532846008434 460031947532846008434 Yes