fa ساخت پلاسمید pDS132::∆icsA جهت حذف هدفمند نواحی از ژن icsA به منظور تولید واکسن زنده تخفیف حدت یافته شیگلا علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle زمینه و هدف: واکسن‌های زنده تخفیف حدت یافته شیگلا پاسخ‌های امیدبخشی در ایجاد ایمنی حفاظتی در آزمایشات بالینی بر روی انسان را نشان داده‌اند. هدف از این تحقیق طراحی و ساخت پلاسمید pDS132::∆icsA به عنوان یک ناقل انتحاری برای حذف هدفمند بخشی از ژن icsA در شیگلا می‌باشد. مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی، گونه و سرووار شیگلای جدا شده از نمونه‌های کودکان مبتلا به اسهال، در بیمارستان‌های فیروزآبادی و میلاد تهران، با استفاده از آزمایش سرم شناسی و واکنش زنجیره‌ای پلیمراز مورد تایید قرار گرفت. آغازگرهای شناسایی ژن icsA طراحی و سپس در حامل pGEM-5zf همسان سازی و تعیین توالی گردید. بر اساس نقشه برش آنزیمی ژن icsA، 1751 جفت باز از ژن icsA با استفاده از آنزیم محدودکننده HincП حذف و ژن جهش یافته ∆icsA به طور موفقیت آمیزی ایجاد گردید. حامل pGEM∆icsA با استفاده از آنزیم‌های SphI و SalI هضم گردید و سپس در حامل انتحاری (pSD132) همسانه سازی شد. صحت فرآیند با آزمایش‌های فنوتیپی و ژنوتیپی تایید گردید. یافته‌ها: سویه شیگلا دیسانتری تیپ1 با آزمایش سرولوژیکی و PCR تایید گردید. توالی ژن icsA سویه بومی با سویه‌های ثبت شده در بانک ژنی یکسان بود. حامل انتحاری pDS132::∆icsA با در بر داشتن 1484 جفت باز، مشتق شده از ژن icsA می تواند به عنوان یک ناقل انتحاری اختصاصی در ایجاد تداخل در ژن icsA به کار رود. نتیجه‌گیری: استفاده از سیستم‌های انتحاری ایجاد جهش هدف مند را تسهیل و در مقایسه با سایر تکنیک‌های اولیه مانند پاساژ متوالی روش اختصاصی و موثرتری می‌باشد. Background: Live attenuated Shigella vaccines have shown promise in inducing protective immune responses in human clinical trials. The aim of this study was to design and construct pDS132::∆icsA as a suicide plasmid for targeted deletion of a region of icsA gene in Shigella. Materials and Methods: In this experimental study, species and serotypes of Shigella isolated from diarrhea samples of children at Firozabadi and Milad Hospitals of Tehran were confirmed by using serological and PCR tests. Identification primers of icsA gene were designed and then cloned to the pGEM-5zf vector and sequenced. According to icsA restriction enzyme map, 1751 bp of icsA gene was deleted by HincП restriction enzyme and the ∆icsA was constructed successfully. The pGEM∆icsA vector was digested by use of SphI and SalI enzymes and was then cloned to a suicide vector (pSD132). Precision of the process was confirmed by phenotype and genotype tests. Results: The Shigella dysenteriae type 1 strain was verified by serological tests and PCR. Sequence of the icsA gene in the native strain was identical to the strains submitted in the gene-bank database. Since the pDS132::∆icsA contains 1484 bp derived from icsA gene, it can be used to disrupt icsA gene as a specific suicide vector. Conclusion: Application of suicide systems facilitated mutant construction in more specific and effective methods in comparison with the other primary techniques such as serial passage. تبادل آللی، ژن icsA ، شیگلا دیسانتری تیپ 1، شیگلوز، ناقل انتحاری Allelic exchange, IcsA, Shigella dysenteriae type 1, Shigellosis, Suicide vector 35 47 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1169-1&slc_lang=fa&sid=1 Mostafa Hosseini مصطفی حسینی Geneticman2005@gmail.com 4600319475328460017115 4600319475328460017115 Yes ------------------ ------------------ Mojtaba Saadati مجتبی سعادتی 4600319475328460017116 4600319475328460017116 No ------------------ ------------------ Mohammad bagher Yakhchali محمد باقر یخچالی 4600319475328460017117 4600319475328460017117 No ------------------ ------------------ Bahar Nayeri Fasaei بهار نیری فسایی 4600319475328460017118 4600319475328460017118 No ------------------ ------------------ Hoora Ahmadydanesh حورا احمدی دانش 4600319475328460017119 4600319475328460017119 No ------------------ ------------------ Morteza Mirzaei مرتضی میرزایی 4600319475328460017120 4600319475328460017120 No ------------------ ------------------ Kamal Baghery کمال باقری 4600319475328460017121 4600319475328460017121 No ----------------- ---------------------- Mokhtar Zare مختار زارع 4600319475328460017122 4600319475328460017122 No --------------------- ------------------