سمیه کیایی، حمید ابطحی، محمد علیخانی، قاسم مسیبی،
دوره 15، شماره 7 - ( 9-1391 )
چکیده
زمینه و هدف: ویبریوکلرا یک باکتری پاتوژن گرم منفی است که عامل بیماری اسهال است. یکی از مهمترین عوامل بیماریزای باکتری، پیلی هم تنظیم شونده با توکسین است. این پیلی به عنوان اولین عامل در کلونیزاسیون و تداوم باکتریها در روده کوچک مورد نیاز است. مواد وروشها: در این تحقیق با استفاده از روش PCR، ژن پیلی هم تنظیم شونده با توکسین ویبریوکلرا تکثیر گردید. پس از تخلیص، ژنهای فوق در پلاسمید 1T4pGEX جهت بیان کلون شد. سپس ساختار پلاسمیدی نوترکیب وارد باکتری اشریشیاکلی شد. تولید پروتئینها توسط IPTG القاء و بهینه سازی شرایط محیط کشت صورت گرفت. پروتئینهای نوترکیب با استفاده از کیت گلوتاتیون S سفاروز خالص و آزمایش وسترن بلات برای تایید پروتئین نوترکیب انجام گرفت. میزان پروتئینها با استفاده از روش برادفورد اندازهگیری شد. یافتهها: نتایج تحقیق حاضر بیان موفقیت آمیز پروتئینهای نوترکیب در سلول اشرشیاکلی را ثابت کرد. پروتئین نوترکیب به وسیله کروماتوگرافی تمایلی تخلیص شد. الگوی واکنش این پروتئینها با آنتیبادیهای ضد آنها، نشان داد که این پروتئینها خاصیت آنتیژنیک دارند. نتیجهگیری: از آنجا که در این مطالعه نشان داده شد، این پروتئینها دارای خاصیت آنتی ژنیسیته هستند، ممکن است به عنوان یک آنتی ژن مناسب برای واکسیناسیون باکتری ویبریوکلرا استفاده شود.
