پریسا امیرکلوانق، معصومه ابتکار، کیهان آزاد منش، کریستینه هارطونیان، مهدی مهدوی،
دوره 14، شماره 4 - ( 7-1390 )
چکیده
زمینه و هدف: اینترفرونهای نوع سه دارای سه لیگاند می باشند: IFN-λ1(IL-29)، IFN-λ2(IL-28A) و IFN-λ3(IL-28B) که این سه لیگاند، گیرنده هترودایمر منحصر به فرد یکسانی را بکار می برند که از زنجیرههای CRF2-12 (IFN-λ-R1/IL-28Ra) و CRF2-4(IL10-R-b) تشکیل یافته است. اینترفرونهای لامبدا چندین خصوصیت از جمله فعالیتهای ضد ویروسی، ضد تکثیری، ایمونومدولاتوری و فعالیت ضد توموری در in vivo را نشان می دهند. هدف این مطالعه کلون کردن ژن IFN-λ1 بدست آمده از سلولهای دندریتیک و بررسی تولید پروتئین آن در حامل بیانی یوکاریوتی می باشد.
مواد و روش ها: در این مطالعه آزمایشگاهی، RNA تام از سلولهای دندریتیک مشتق شده از مونوسیت تحریک شده با صد ng/ml از LPSاستخراج گردید. cDNA از RNA کل سنتز شد. سپس cDNA مربوط به IFN-λ1 با پرایمرهای اختصاصی توسط PCR تکثیر و در داخل حامل PTZ57R/Tدر اشرشیاکلی سویه DH5α کلون شد. سپس با استفاده از اندونوکلئازهای محدودالاثر KpnI و BamHI به داخل پلاسمید pcDNA3.1+ ساب کلون شد. بعد از انتقال به HEK293T، بیان پروتئین توسط روش ELISA ساندویچی تایید شد.
نتایج: توالی DNA وارد شده مشابه با توالی کد کننده IFN-λ1 موجود در Gene Bank بود. ژن IFN-λ1 در سلول های ترانسفکت شده رونویسی و بیان آن در سلول های HEk293T توسط الیزای ساندویچی تأئید گردید.
نتیجه گیری: کلونینگ و بیان موفق IFN-λ1 میتواند نخستین گام برای تولید و تحقیقات بیشتر درباره فعالیتهای این سایتوکاین و فراهم آوردن زمینه های تحقیقاتی برای کسب روشهای درمانی جدید برای سرطان، عفونت های ویروسی، بیماریهای خود ایمنی و آلرژی و طراحی واکسنهای مؤثرتر بکار رود