حسین مرسلی، گلناز اسعدی تهرانی، حانیه اسعدی، سجاد یزدان ستاد، رضا نجف پور،
دوره 20، شماره 6 - ( شهریورماه 1396 1396 )
چکیده
چکیده
زمینه و هدف: سالمونلا و اشرشیا کلی از مهم ترین پاتوژنهای آلودهکننده مواد غذایی به ویژه فرآوردههای گوشتی هستند. تشخیص سریع، اختصاصی و همزمان این پاتوژنها با انتخاب و بهینهسازی ژنهای اختصاصی از اهمیت بالایی برخوردار است. این مطالعه با هدف تشخیص توأم سالمونلا و اشریشیا کلی O157:H7 در فرآوردههای گوشتی و بررسی میزان آلودگی بر مبنای تکثیر دو ژن rfbE و invA با روش Multiplex PCR در استان زنجان واقع در شمال غربی ایران انجام گرفت.
مواد و روشها: تعداد 74 نمونه گوشت به صورت تصادفی از نواحی مختلف استان زنجان جمعآوری شد. 25 گرم از هر نمونه گوشت در 225 میلیلیتر محیط مولر هینتون براث به طور کامل یکنواختسازی و گرماگذاری گردید. جدایههای باکتری خالصسازی شد و استخراج DNA انجام گردید. تکثیر همزمان قطعات ژنی rfbE و invA با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و با بهینهسازی واکنش PCR چندگانه انجام گرفت. در نهایت، حساسیت این روش با تلقیح رقتهای مختلف از باکتریها به نمونههای گوشتی بررسی گردید.
یافته‌ها: از بین 74 نمونه گوشتی، تعداد 6 نمونه (1/8 درصد) به اشریشیا کلی O157:H7، تعداد 4 نمونه (4/5 درصد) به سالمونلا و تعداد 2 نمونه (7/2 درصد) به هر دو باکتری آلوده بودند. واکنش PCR چندگانه در تشخیص توام هر دو پاتوژن در کمترین رقت تلقیح شده به نمونههای گوشتی نیز از حساسیت بالایی برخوردار بود.
نتیجه‌گیری: در این مطالعه، واکنش PCR چندگانه بر اساس ژنهای بیماریزایی سالمونلا و اشریشیا کلی O157:H7 جهت تشخیص سریع و همزمان این پاتوژنها با حساسیت و اختصاصیت بالا بهینه شد. واکنش PCR چندگانه به منظور شناسایی همزمان پاتوژنهای منتقله از راه غذا در کنترل آلودگیهای مواد غذایی روش قابل اعتمادی است.
