آذر مرادخانی، حمید ابطحی، ایرج پاکزاد، مسعوده کریمی،
دوره ۱۴، شماره ۲ - ( دو ماهنامه خرداد و تیر ۱۳۹۰ )
چکیده
زمینه و هدف: هیالورونیداز A از جمله پروتئینهای ترشحی استرپتوکوک پیوژن بوده که دارای قدرت آنتی ژنیک میباشد. امروزه با ردیابی آنتی بادیهای ضد این پروتئین روند عفونت ناشی از این باکتری پیگیری میشود. در این تحقیق سعی گردیده تا تولید پروتئین نوترکیب هیالورونیداز A در باکتری اشریشیا کلی انجام گیرد.
مواد و روش ها: در این تحقیق تجربی با طراحی پرایمر اختصاصی و استفاده از روش PCR، ژن هیالورونیداز A از استرپتوکوک پیوژن تکثیر گردید. پس از تخلیص، ژن فوق در ناقل پلاسمیدی pET۳۲a جهت بیان کلون گردید. سپس ساختار پلاسمیدی pET۳۲a -hylA وارد باکتری اشریشیا کلی سویه BL۲۱- DE۳-plySs شد. تولید پروتئین با القاء توسط IPTG صورت گرفت. پروتئین نوترکیب با استفاده از کیت Ni-NTA خالص و میزان پروتئین با استفاده از روش برادفورد اندازه گیری شد. آزمایش وسترن بلات برای تایید پروتئین نوترکیب انجام شد.
یافته ها: ترادف نوکلئوتیدی ژن تکثیر شده توسط روش PCR با ژن هیالورونیداز A استرپتوکوک پیوژن یکسان بود. تولید پروتئین نوترکیب هیالورونیداز A با القاء پلاسمید pET۳۲a -hylA توسطIPTG انجام گردید. تخلیص پروتئین با روش کروماتوگرافی تمایلی و با استفاده از کیت Ni-NTA صورت گرفت. میزان پروتئین خالص شده برابر ۵۰۰ میکروگرم در میلی لیتر به دست آمد. سرم موش واجد آنتی هیالورونیداز A در روش وسترن بلات با پروتئین تولید شده واکنش داد.
نتیجه گیری: تولید پروتئین نوترکیب هیالورونیداز A در میزبان اشریشیا کلی نیز امکان پذیر است. پروتئین تولید شده خاصیت آنتی ژنیک خود را به خوبی حفظ میکند.
ایرج پاکزاد، سویا بهمنی، سبحان غفوریان، حسن حسین زادگان،
دوره ۱۴، شماره ۷ - ( ویژه نامه بروسلوز ۱۳۹۰ )
چکیده
زمینه و هدف: بروسلوز یکی از مهمترین بیماریهای مشترک بین انسان و دام در دنیا و عامل زیانهای اقتصادی بسیاری به ویژه در نواحی اندمیک بیماری است. تشخیص بیماری به صورت سنتی به وسیله کشت خون و روشهای سرولوژیک انجام میگیرد که جهت تشخیص با حساسیت و اختصاصیت بالاتر روش PCR توصیه میگردد. در این مطالعه تشخیص بروسلوز در انسان به روش PCR با استفاده از ژنهای srRNA۱۶و ۱۲/L۷L و روشهای سرولوژیک مرسوم مدنظر است.
مواد و روشها: در این مطالعه مقطعی، ۷۰۰ نمونه خون از بیماران تب دار مشکوک به بروسلوزیس که به بیمارستانها و آزمایشگاههای شهر ایلام جهت انجام آزمایشات سرولوژیک مراجعه نموده بودند جمعآوری گردید و به وسیله آزمایش رزبنگال غربالگری شد، سپس ۵۰ نمونه مثبت رزبنگال تحت آزمایشات رایت، کومبس رایت و PCR با استفاده از دو ژن srRNA۱۶ و ۱۲/L۷L قــرار گرفت و ۵۰ نمونه منفی رزبنگال نیز به وسیله PCR با استفاده از دو ژن فوق الذکر آزمایش گردید.
یافتهها: از ۷۰۰ نمونهای که به وسیله رزبنگال آزمایش شدند ۱۲۵ نمونه مثبت و ۵۷۵ نمونه منفی بود. ۵۰ نمونه مثبت رزبنگال در PCR به وسیله هر دو ژن مثبت و ۵۰ نمونه منفی رزبنگال در PCR به وسیله هر دو ژن منفی بودند. ۴۷ نمونه در آزمایش رایت و ۴۹ نمونه در آزمایش کومبس رایت تیتر بالای ۶۰: ۱ داشتند.
نتیجه گیری: روش PCR در مقایسه با روشهای سرولوژیک در تشخیص بروسلوز انسانی دارای حساسیت و اختصاصیت بالاتری است. PCR با استفاده از ژن۱۲/L۷L دارای حساسیت مشابه ژن srRNA۱۶ میباشد و میتوان از آن در تشخیص بروسلوز انسانی استفاده نمود.
