سعید حاجی حاشمی، استنلی وایت،
دوره 10، شماره 3 - ( فصلنامه 1386 )
چکیده
مقدمه: مطالعات انجام شده نشان داده که آندوسیتوز کانال‌های پتاسیمی ROMK برای تنظیم ترشح K+ در قسمت‌های انتهای نفرون و مجاری جمع کننده مهم می‌باشد. در این مطالعه اثرات موتاسیون V364D بر پایداری کانال پتاسیمی ROMK2 هنگامی که در غشاء اووسیت بیان می‌شود بررسی گردیده است. روش کار: در این پژوهش تجربی اووسیت‌های Xenopus laevis به روش استاندارد با استفاده از کلاژناز جدا گردیدند. با استفاده از روش quick-change در انتهای کربوکسیل کانال پتاسیمی ROMK2 موتاسیون زای مستقیم ایجاد گردید. cRNA که ROMK2 وموتاسیون V364Dرا کد می‌کرد، سه روز قبل از قرار دادن در محلول BFA (زمان صفر) به اووسیت‌ها تزریق می‌شد. به محیط کشت برفلدین A (+BFA) به مقدار 5-25 میکرومولار (مهار کننده انتقال پروتئین‌های ساخته شده به غشاء) یا اتانول به عنوان حلال BFA (BFA -) اضافه گردید. با استفاده از تکنیک ثابت نگه داشتن ولتاژ با استفاده از دو الکترود جریان یونی و پتانسیل استراحت غشاء اووسیت‌ها پس از بیان کانال‌های پتاسیمی ROMK2 و موتاسیون V364D اندازه‌گیری گردید. جهت تجزیه و تحلیل اطلاعات از آنالیز واریانس یک طرفه و تست تی آموزشی استفاده شد. نتایج: یافته‌های حاصل نشان داد اثر BFA بر روی میزان جریان به صورت وابسته دوز است. بر خلاف کانال‌های پتاسیمی ROMK2 اووسیت‌هایی که موتاسیون V354D را بیان می‌کردند در هیچ کدام از زمان‌های ثبت مورد نظر در طی دوره انکوبه شدن در BFA در هر دو غلظت 5 و 25 میکرو مولار کاهشی در میزان جریان یونی این کانال پتاسیمی دیده نشد. برای ROMK2 پس از این که اووسیت‌ها 48 ساعت تحت تأثیر BFA بودند میزان کسر جریان برابر با 05/0±24/0 (16=n) بود در حالی که برای موتاسیون V364D برابر با 09/0±17/1 بود. نتیجه گیری: نتایج، افزایش پایداری و توقف آندوسیتوز کانال‌های پتاسیمی ROMK2 غشاء با ایجاد موتاسیون V364D را نشان می‌داد. بنابر این باید بین انتهای کربوکسیل کانال‌های پتاسیمی ROMK2 و اجزاء مسیر آندوسیتوز تداخل عمل وجود داشته باشد و قسمت داخلی ناحیه PDZ (S-E-V) در آندوسیتوز و پایداری کانال‌های پتاسیمی ROMK2 در غشاء دخالت دارد.
سعید حاجی هاشمی، والری کولینز، گوردون کوپر، استنلی وایت،
دوره 14، شماره 6 - ( دو ماهنامه بهمن و اسفند 1390 )
چکیده
زمینه و هدف: سندرم بارتر از اختلالات توبولی کلیه است که سبب کاهش باز جذب سدیم و کلر در قسمت ضخیم بازوی بالا رونده لوله هنله و سبب دفع سدیم و کلر می‌شود. سندرم بارتر نوع 2 با موتاسیونهای ژن KCNJ1 ایجاد می‌شود که کانال‌های پتاسمی حساس به آدنوزین تری فسفات تصحیح کننده به سمت داخلKir1.1 (ROMK) را کد میکند. در این پژوهش اثرات موتاسیون جایگاه 338 بر روی کانال پتاسیمی ROMK2 بررسی گردیده است.
مواد و روشها: در این مطالعه آزمایشگاهی، با موتاسیونزای مستقیم اسید آمینه ترئونین جایگزین اسید آمینه متیونین گردید (موتاسیون M338T). کانال‌های پتاسیمی ROMK2 نوع طبیعی و نوع موتاسیون یافته M338T درون اووسیت‌های زاینوپوس لویس و به صورت موقتی در سلولهای کشت داده شده MDCK بیان گردیدند. با تکنیک ثابت نگه داشتن ولتاژ با استفاده از دو الکترود، جریانهای یونی مربوط به کانال‌های پتاسیمی ROMK2 و موتاسیون یافته در اووسیت‌ها اندازه‌گیری گردید. با تکنیک میکروسکوپی کونفو کال توزیع کانال‌های پتاسیمی ROMK مارک شده با EGFP (برچسبدار) در غشاهای سلولهای MDCK بررسی گردید.
یافتهها: کانال‌های پتاسیمی ROMK2 نوع طبیعی و نوع موتاسیون یافته M338T درون اووسیت‌ها عملکردی یکسان داشتند. توزیع کانال‌های پتاسیمی ROMK2 طبیعی و موتاسیون یافته M338Tدر غشای سلولهای MDCK فاقد قطبیت و سلولهای دارای قطبیت تفاوت داشت.
نتیجه گیری: موتاسیون جایگاه M338T باعث تغییر در تداخلات قسمت کربوکسیل کانال‌های پتاسیمیROMK2 میگردد. هدف گذاری اشتباهی در in vivo، نیروی پیش برنده ترشح پتاسیم و باز جذب سدیم و کلر در این قسمت نفرون را کاهش میدهد.
