مهدی رضائی، حسین هنری، علی محمد زند، lمحمد علی عارف پور ترابی،
دوره 15، شماره 9 - ( ماهنامه بهمن 1391 )
چکیده
زمینه و هدف: سیاهزخم یک بیماری مشترک بین انسان و دام است. عامل ایجاد کننده بیماری، باکتری باسیلوس آنتراسیس میباشد که آنتیژن حفاظتکننده و ناحیه یک فاکتور کشنده (LFD1) ایمونوژنهای قوی این باکتری بوده و همواره به عنوان کاندیدای واکسن علیه باسیلوس آنتراسیس در نظر گرفته شدهاند. هدف این مطالعه بیان و تخلیص LFD1 در باکتری Escherichia coli و تولید آنتیبادی پلیکلونال علیه آن در موش سوری میباشد. مواد و روشها: در این مطالعه تجربی، ژن LFD1 با جایگاههای برش آنزیمی BamHI و XhoI با واکنش PCR تکثیر و بعد از جداسازی، در وکتور بیانی pET28a(+) همسانهسازی گردید. به منظور بیان ژن، این وکتور به باکتریهای صلاحیتدار E.coli-BL21(DE3)PLysS تراریخت شد. بیان ژن LFD1 تحت القایIPTG انجام و بعد از تخلیص پروتئین با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی، آنتیژن حاصل در چهار نوبت به موشهای سوری تزریق شد. آنتیبادی پلیکلونال تولید شده در سرم موشها اندازهگیری گردید. یافتهها: ژن LFD1 کلون شده در وکتور بیانی pET28a(+) به وسیله PCR، هضم آنزیمی و توالییابی تأیید شد. همچنین پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله SDS-PAGE و لکهگذاری وسترن تایید گردید. در نهایت آنتیبادی پلیکلونال تولید شده از سرم موش سوری جدا شده و به وسیله تست الایزا ارزیابی و تأیید گردید. نتیجهگیری: با توجه به بیان مناسب، تولید آسان این آنتیژن و تیتر آنتیبادی پلیکلونال تولید شده علیه آنتیژن LFD1 به دلیل ایمونوژنیسیته آن در موشهای سوری، میتوان آن را به عنوان کاندید واکسن علیه سیاهزخم در نظر گرفت.